| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-29页 |
| 1.1 亮氨酸的营养功能 | 第14页 |
| 1.2 mTORC1信号通路及其营养调节机制研究进展 | 第14-21页 |
| 1.2.1 mTORC1的功能 | 第14-15页 |
| 1.2.2 氨基酸调节mTORC1的激活过程 | 第15-20页 |
| 1.2.3 亮氨酸调节mTORC1的激活过程 | 第20-21页 |
| 1.3 mTORC1信号通路对蛋白质合成的调控 | 第21-24页 |
| 1.3.1 mTORC1信号通路对翻译起始的调控 | 第21-22页 |
| 1.3.2 mTORC1信号通路对翻译延伸的调控 | 第22-23页 |
| 1.3.3 mTORC1信号通路对蛋白质周转的调控 | 第23-24页 |
| 1.4 定量蛋白质组学-iTRAQ技术 | 第24-25页 |
| 1.5 无细胞体系概述 | 第25-28页 |
| 1.5.1 无细胞体系的定义 | 第25页 |
| 1.5.2 无细胞体系的应用 | 第25-28页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第28-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-45页 |
| 2.1 试验材料 | 第29-31页 |
| 2.1.1 细胞系、菌种、载体 | 第29页 |
| 2.1.2 主要药品及试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.3 主要培养基及其配制 | 第30页 |
| 2.1.4 试验用缓冲液及其配制 | 第30-31页 |
| 2.2 试验方法 | 第31-45页 |
| 2.2.1 HA-raptor的表达并纯化 | 第31-33页 |
| 2.2.2 胞浆蛋白S100的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.3 溶酶体的粗提取 | 第34页 |
| 2.2.4 细胞培养主要步骤 | 第34-35页 |
| 2.2.5 Western blot | 第35-38页 |
| 2.2.6 无细胞体系试验 | 第38-39页 |
| 2.2.7 iTRAQ样品的制备及iTRAQ实验步骤 | 第39-42页 |
| 2.2.8 pmCherry-C1-Lamp2质粒的构建 | 第42-44页 |
| 2.2.9 pEGFP-C1-CANX质粒的构建 | 第44页 |
| 2.2.10 激光共聚焦显微镜的主要操作步骤 | 第44-45页 |
| 第三章 结果与分析 | 第45-62页 |
| 3.1 无细胞体系的构建 | 第45-48页 |
| 3.1.1 HA-raptor融合蛋白的表达与纯化 | 第45-46页 |
| 3.1.2 溶酶体的提取与检测 | 第46页 |
| 3.1.3 利用无细胞体系研究Raptor与溶酶体P20的结合 | 第46-48页 |
| 3.2 无细胞体系差异蛋白的鉴定及筛选 | 第48-53页 |
| 3.2.1 无细胞体系样品提取及定量 | 第48-50页 |
| 3.2.2 无细胞体系蛋白质鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2.3 无细胞体系差异蛋白质的筛选 | 第51-53页 |
| 3.3 差异蛋白质的生物信息学分析 | 第53-59页 |
| 3.3.1 差异蛋白质的GO分析 | 第53-54页 |
| 3.3.2 差异蛋白质的COG注释分析 | 第54-55页 |
| 3.3.3 差异蛋白质的Pathway注释分析 | 第55-57页 |
| 3.3.4 参与亮氨酸调节mTORC1信号通路的关键差异候选蛋白分析 | 第57-59页 |
| 3.4 关键差异候选蛋白的验证 | 第59-62页 |
| 3.4.1 pmCherry-C1-Lamp2质粒的构建 | 第59页 |
| 3.4.2 pEGFP-C1-CANX质粒的构建 | 第59-60页 |
| 3.4.3 关键差异候选蛋白CANX在无细胞体系样品中的检测 | 第60-61页 |
| 3.4.4 亮氨酸调节关键差异候选蛋白CANX与Lamp2的共定位 | 第61-62页 |
| 第四章 讨论与小结 | 第62-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
