| 目录 | 第3-7页 |
| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-35页 |
| 1.1 蜡梅研究进展 | 第13-18页 |
| 1.1.1 形态与分布 | 第13页 |
| 1.1.2 种属关系与品种分类 | 第13-14页 |
| 1.1.3 蜡梅保鲜 | 第14-15页 |
| 1.1.4 开发与应用 | 第15页 |
| 1.1.5 蜡梅分子生物学研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2 扩张蛋白研究进展 | 第18-30页 |
| 1.2.1 酸生长学说与扩张蛋白的发现 | 第18-19页 |
| 1.2.2 扩张蛋白结构 | 第19页 |
| 1.2.3 扩张蛋白的作用机理 | 第19-21页 |
| 1.2.4 扩张蛋白物化特性 | 第21页 |
| 1.2.5 扩张蛋白基因家族的分类 | 第21-23页 |
| 1.2.6 扩张蛋白表达的特异性与表达调控 | 第23-26页 |
| 1.2.7 扩张蛋白功能 | 第26-28页 |
| 1.2.8 扩张蛋白提取与活性研究方法 | 第28-30页 |
| 1.2.9 扩张蛋白研究展望 | 第30页 |
| 1.3 植物器官脱落研究进展 | 第30-35页 |
| 1.3.1 器官脱落的形态解剖学和细胞学特征 | 第31页 |
| 1.3.2 脱落过程中离层的生理生化特征 | 第31页 |
| 1.3.3 脱落相关基因的研究 | 第31-32页 |
| 1.3.4 植物器官脱落的调控 | 第32-35页 |
| 第二章 引言 | 第35-37页 |
| 2.1 研究背景 | 第35页 |
| 2.2 研究目的和意义 | 第35页 |
| 2.3 技术路线 | 第35-37页 |
| 第三章 CpEXP1基因的克隆及原核表达分析 | 第37-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第37页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第37页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第37页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第37-38页 |
| 3.1.5 自配试剂 | 第38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-47页 |
| 3.2.1 CpEXP1基因的克隆 | 第38-42页 |
| 3.2.2 原核表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 3.2.3 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第45-46页 |
| 3.2.4 重组蛋白的体外活性测定 | 第46-47页 |
| 3.3 结果与分析 | 第47-51页 |
| 3.3.1 CpEXP1基因的克隆 | 第47-48页 |
| 3.3.2 原核表达载体构建结果 | 第48-49页 |
| 3.3.3 CpEXP1重组蛋白的提取与纯化 | 第49-50页 |
| 3.3.4 重组蛋白活性测定 | 第50-51页 |
| 3.4 小结 | 第51-52页 |
| 3.5 讨论 | 第52-55页 |
| 3.5.1 影响原核表达的因素分析 | 第52页 |
| 3.5.2 关于扩张蛋白的体外活性 | 第52-55页 |
| 第四章 CpEXP1基因在蜡梅不同组织、花器官、不同发育阶段的表达 | 第55-65页 |
| 4.1 实验材料 | 第55页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第55页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第55页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-58页 |
| 4.2.1 蜡梅组织的采集 | 第55-56页 |
| 4.2.2 蜡梅不同发育时期花芽的采集 | 第56-57页 |
| 4.2.3 总RNA的提取与反转录 | 第57页 |
| 4.2.4 实时荧光定量PCR | 第57-58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-62页 |
| 4.3.1 蜡梅总RNA质量检测 | 第58页 |
| 4.3.2 实时荧光定量PCR引物筛选与熔解曲线分析 | 第58-59页 |
| 4.3.3 实时荧光定量PCR引物标准曲线分析结果 | 第59-60页 |
| 4.3.4 CpEXP1基因表达的实时荧光定量分析 | 第60-62页 |
| 4.4 小结 | 第62页 |
| 4.5 讨论 | 第62-65页 |
| 4.5.1 关于蜡梅开花过程划分 | 第62页 |
| 4.5.2 关于CpEXP1基因表达的特异性 | 第62-65页 |
| 第五章 不同脱落力下蜡梅花梗CpEXP1基因表达、扩张蛋白活性与离层形成关系 | 第65-77页 |
| 5.1 实验材料 | 第65页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第65页 |
| 5.1.2 主要仪器设备 | 第65页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第65页 |
| 5.2 实验方法 | 第65-67页 |
| 5.2.1 实验材料的选取与等级划分 | 第65-66页 |
| 5.2.2 瓶插过程中花蕾脱落力的测定 | 第66页 |
| 5.2.3 扩张蛋白的提取与活性测定 | 第66页 |
| 5.2.4 花蕾脱离过程中离层形成的解剖学观察 | 第66-67页 |
| 5.2.5 不同脱落力花梗中CpEXP1基因的表达 | 第67页 |
| 5.3 结果与分析 | 第67-75页 |
| 5.3.1 花蕾着生情况调查结果 | 第67-68页 |
| 5.3.2 脱落力影响因子的研究结果 | 第68-70页 |
| 5.3.3 蜡梅花蕾脱落力的分级 | 第70-71页 |
| 5.3.4 脱落力与扩张蛋白活性的变化 | 第71-73页 |
| 5.3.5 瓶插过程中花蕾离层的形成观察 | 第73-74页 |
| 5.3.6 总RNA质量检测 | 第74页 |
| 5.3.7 CpEXP1基因在不同脱落力花梗中的表达 | 第74-75页 |
| 5.4 小结 | 第75页 |
| 5.5 讨论 | 第75-77页 |
| 5.5.1 根据脱落力大小进行中蕾期花蕾分级的可行性 | 第75页 |
| 5.5.2 脱落过程中脱落力、CpEXP1基因表达、扩张蛋白活性及离层形成的关系 | 第75-77页 |
| 第六章 CpEXP1基因超表达载体构建及功能分析 | 第77-89页 |
| 6.1 实验材料 | 第77-78页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第77页 |
| 6.1.2 菌株与载体 | 第77页 |
| 6.1.3 主要仪器设备 | 第77页 |
| 6.1.4 主要试剂 | 第77页 |
| 6.1.5 自配试剂 | 第77-78页 |
| 6.2 实验方法 | 第78-81页 |
| 6.2.1 CpEXP1基因的克隆 | 第78页 |
| 6.2.2 CpEXP1基因植物表达载体的构建 | 第78-79页 |
| 6.2.3 植物表达载体重组质粒转化根癌农杆菌 | 第79-80页 |
| 6.2.4 CpEXP1基因转化拟南芥的功能分析 | 第80-81页 |
| 6.3 结果与分析 | 第81-87页 |
| 6.3.1 植物表达载体的构建及转化农杆菌结果 | 第81-82页 |
| 6.3.2 CpEXP1基因转化拟南芥的功能分析结果 | 第82-87页 |
| 6.4 小结 | 第87页 |
| 6.5 讨论 | 第87-89页 |
| 6.5.1 CpEXP1基因表达与植株形态的变化 | 第87页 |
| 6.5.2 关于转CpEXP1基因拟南芥的抗逆性 | 第87-89页 |
| 第七章 CpEXP1基因启动子的克隆及功能分析 | 第89-105页 |
| 7.1 实验材料 | 第89页 |
| 7.1.1 植物材料 | 第89页 |
| 7.1.2 载体和菌种 | 第89页 |
| 7.1.3 主要试剂 | 第89页 |
| 7.1.4 主要设备 | 第89页 |
| 7.1.5 常用溶液及培养基配方 | 第89页 |
| 7.2 实验方法 | 第89-95页 |
| 7.2.1 蜡梅基因组DNA的提取 | 第89-90页 |
| 7.2.2 DNA质量与浓度的测定 | 第90页 |
| 7.2.3 hiTAIL-PCR法扩增启动子序列 | 第90-92页 |
| 7.2.4 CpEXP1启动子片段的获得 | 第92-93页 |
| 7.2.5 克隆载体pMD-CpEXP1-pro构建 | 第93页 |
| 7.2.6 CpEXP1基因启动子序列的生物信息学分析 | 第93页 |
| 7.2.7 植物表达载体PBI121-CpEXP1-pro的构建 | 第93-94页 |
| 7.2.8 农杆菌感受态的制备、转化、转化子的筛选 | 第94页 |
| 7.2.9 农杆菌介导的叶盘侵染法检测CpEXP1-pro启动子瞬时表达活性 | 第94-95页 |
| 7.2.10 花序侵染法转化拟南芥进行报告基因的稳定表达分析 | 第95页 |
| 7.3 结果与分析 | 第95-103页 |
| 7.3.1 蜡梅基因组DNA的提取 | 第95-96页 |
| 7.3.2 hiTAIL-PCR产物电泳结果分析 | 第96-97页 |
| 7.3.3 目的片段的回收与测序 | 第97-98页 |
| 7.3.4 启动子的生物信息学分析 | 第98-99页 |
| 7.3.5 克隆载体pMD-CpEXP1-pro的构建 | 第99-100页 |
| 7.3.6 植物表达载体PBI121-CpEXP1-pro的构建 | 第100页 |
| 7.3.7 含植物表达载体质粒PBI121-CpEXP1-pro工程菌的获得 | 第100-101页 |
| 7.3.8 CpEXP1-pro启动子驱动GUS报告基因在烟草中的瞬时表达分析 | 第101-102页 |
| 7.3.9 CpEXP1-pro启动子驱动GUS报告基因在拟南芥中的稳定表达分析 | 第102-103页 |
| 7.4 小结 | 第103页 |
| 7.5 讨论 | 第103-105页 |
| 第八章 总结 | 第105-107页 |
| 8.1 主要结论 | 第105页 |
| 8.2 主要创新点 | 第105页 |
| 8.3 下一步研究计划 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-121页 |
| 缩略词表 | 第121-123页 |
| 学习期间发表的论文及参与的科研项目 | 第123-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
