| 第一章 前言 | 第9-43页 |
| 第一节 细菌对抗生素耐药性的概述 | 第9-26页 |
| 一 菌耐药性机制概述 | 第9-11页 |
| 二 细菌对喹诺酮类抗菌药物产生耐药性的作用机制 | 第11-25页 |
| (一) 喹诺酮类抗菌药物的作用机制 | 第11-12页 |
| (二) 喹诺酮类抗菌药物的作用靶位 | 第12-14页 |
| (三) 喹诺酮类与 DNA 拓扑异构酶复合物的交互作用 | 第14-15页 |
| (四) 喹诺酮类-DNA-拓扑异构酶复合物与 DNA 复制叉 和 RNA 多聚酶的交互作用 | 第15-16页 |
| (五) 细菌对喹诺酮类抗菌药物产生耐药性的基因突变机制 | 第16-22页 |
| (六) 细菌对喹诺酮类药物产生耐药性的主动外排机制 | 第22-25页 |
| 三 细菌耐药性的检测 | 第25-26页 |
| 第二节 蛋白质组技术及其应用现状 | 第26-41页 |
| 一 蛋白质组学研究的意义及发展趋势 | 第26-28页 |
| 二 蛋白质组学研究的相关技术 | 第28-37页 |
| (一) 蛋白质组研究中的样品制备 | 第28-29页 |
| (二) 双向电泳技术 | 第29-31页 |
| (三) 图像分析技术 | 第31-33页 |
| (四) 蛋白质的质谱分析技术 | 第33-35页 |
| (五) 蛋白质微测序 | 第35页 |
| (六) 蛋白组数据库 | 第35-36页 |
| (七) 蛋白质组研究的新技术 | 第36-37页 |
| 三 医学蛋白质组学研究的应用 | 第37-41页 |
| (一) 人类疾病的蛋白质组研究 | 第37-39页 |
| (二) 病源微生物蛋白组研究 | 第39-41页 |
| 第三节 本研究的立题依据及意义 | 第41-43页 |
| 第二章 实验方法及结果 | 第43-114页 |
| 第一节 体外模拟绿脓杆菌对环丙沙星耐药的进化过程 | 第44-59页 |
| 实验材料及试剂 | 第44-45页 |
| 实验仪器 | 第45页 |
| 实验方法 | 第45-53页 |
| 1 细菌菌株的保存 | 第45-46页 |
| 2 连续琼脂糖扩散法体外模拟绿脓杆菌环丙沙星耐药的进化过程 | 第46-49页 |
| 3 连续试管稀释法体外模拟绿脓杆菌环丙沙星耐药的进化过程 | 第49-51页 |
| 4 环丙沙星在绿脓杆菌体内浓度的测定 | 第51-53页 |
| 实验结果 | 第53-59页 |
| 1 连续药物扩散法体外模拟细菌耐药的进化过程 | 第53-56页 |
| 2 连续试管稀释法体外模拟细菌耐药的进化过程 | 第56页 |
| 3 环丙沙星在绿脓杆菌体内浓度的测定 | 第56-59页 |
| 第二节 绿脓杆菌耐药进化过程中基因突变的分析 | 第59-76页 |
| 实验材料及试剂 | 第59-60页 |
| 实验仪器 | 第60页 |
| 实验方法 | 第60-63页 |
| 1 DNA 提取 | 第60-61页 |
| 2 PCR 扩增 | 第61-62页 |
| 3 SSCP 分析 | 第62-63页 |
| 4 基因突变的稳定性分析 | 第63页 |
| 5 PCR 产物的序列测定 | 第63页 |
| 6 DNA 测序结果的计算机分析 | 第63页 |
| 实验结果 | 第63-76页 |
| 1 PCR-SSCP 检测 QRDRs 基因突变 | 第63-65页 |
| 2 PCR 产物的序列测定及计算机分析 | 第65-67页 |
| 3 突变稳定性的分析 | 第67-76页 |
| 第三节 绿脓杆菌耐药进化过程的蛋白质组学研究 | 第76-105页 |
| 实验材料及试剂 | 第76-79页 |
| 实验仪器及计算机软件 | 第79-80页 |
| 实验方法 | 第80-93页 |
| 一 样品准备 | 第80-82页 |
| 二 双向电泳 | 第82-86页 |
| 1 第一向等电聚焦电泳 | 第82-83页 |
| 2 第二向聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第83-84页 |
| 3 聚丙烯酰胺凝胶染色 | 第84-86页 |
| 三 绿脓杆菌的理论蛋白组数据库的建立 | 第86页 |
| 四 双向电泳凝胶的计算机图像分析 | 第86-87页 |
| 五 蛋白质的质谱分析 | 第87-92页 |
| 六 蛋白质 N 末端氨基酸测序 | 第92-93页 |
| 实验结果 | 第93-105页 |
| 1 标准蛋白质浓度 OD595 曲线的绘制 | 第93页 |
| 2 2D 电泳样品上样量测定 | 第93-94页 |
| 3 双向电泳结果 | 第94-95页 |
| 4 Phoretix-2D 图像分析 | 第95-96页 |
| 5 差异蛋白的质谱分析 | 第96-103页 |
| 6 N 末端氨基酸测序 | 第103-105页 |
| 第四节 “可能的 ABC-ATP 结合因子”的功能分析 | 第105-114页 |
| 实验材料及试剂 | 第105-106页 |
| 实验仪器 | 第106页 |
| 实验方法 | 第106-109页 |
| 1 细菌 RNA 提取 | 第106页 |
| 2 RT-PCR 扩增 | 第106-107页 |
| 3 DNAzyme 的设计与构建 | 第107-108页 |
| 4 DNAzyme 转染 P. aeruginosa | 第108-109页 |
| 实验结果 | 第109-114页 |
| 1 在细菌耐药进化过程中'可能的ABC-ATP结合因子'mRNA的表达 | 第109-110页 |
| 2 DNAzyme 抑制细菌耐药性 | 第110-112页 |
| 3 DNAzyme 及对照 H2O/对照 DNAzyme处理菌体，其体内环丙沙星菌体浓度的变化 | 第112-114页 |
| 第三章 实验结果讨论 | 第114-129页 |
| 一 研究绿脓杆菌对环丙沙星耐药进化过程的意义 | 第114-117页 |
| 二 绿脓杆菌对环丙沙星耐药进化过程中基因突变的分析 | 第117-120页 |
| 三 绿脓杆菌对环丙沙星耐药进化过程蛋白组变化的分析 | 第120-129页 |
| 1 蛋白组研究方法 | 第120-125页 |
| 2 绿脓杆菌对环丙沙星耐药进化过程蛋白组变化 | 第125-127页 |
| 3 “可能的 ABC-ATP 结合因子”功能研究 | 第127-129页 |
| 实验结论 | 第129-131页 |
| 参考文献 | 第131-144页 |
| 攻博期间发表的学术论文及其他成果 | 第144-145页 |
| 中文摘要 | 第145-152页 |
| 英文摘要 | 第152页 |
| 致谢 | 第157-160页 |
