摘要 | 第3-4页 |
Abstract | 第4-5页 |
缩略词英文对照表 | 第6-11页 |
1 前言 | 第11-18页 |
1.1 果实冷害研究状况 | 第11-12页 |
1.2 冷锻炼处理减轻果实贮藏冷害 | 第12-13页 |
1.3 转录组测序的研究进展 | 第13-14页 |
1.4 ERF转录因子的研究进展 | 第14-16页 |
1.4.1 ERF转录因子的结构 | 第14-16页 |
1.4.2 植物冷害与ERF转录因子研究进展 | 第16页 |
1.5 植物组蛋白去乙酰化酶基因研究进展 | 第16-17页 |
1.6 植物ERF转录因子和组蛋白去乙酰化酶HDAC关系的研究进展 | 第17页 |
1.7 本文的研究目的与意义 | 第17-18页 |
2 材料与方法 | 第18-35页 |
2.1 供试材料 | 第18页 |
2.2 冷锻炼处理方法 | 第18-19页 |
2.3 黄瓜生理指标测定的方法 | 第19-20页 |
2.3.1 黄瓜果实冷害发生率和冷害发生指数的测定 | 第19页 |
2.3.2 黄瓜果实失重率的测定 | 第19页 |
2.3.3 黄瓜果实相对电导率的测定 | 第19页 |
2.3.4 黄瓜果实TSS的测定 | 第19页 |
2.3.5 黄瓜果实叶绿素含量的测定 | 第19-20页 |
2.3.6 黄瓜果实叶绿素荧光的测定 | 第20页 |
2.4 样品总RNA的提取及检测 | 第20-21页 |
2.4.1 样品总RNA提取 | 第20-21页 |
2.4.2 样品总RNA浓度的测定及完整性检测 | 第21页 |
2.5 黄瓜转录组测序 | 第21-24页 |
2.5.1 MRNA的分离 | 第22-23页 |
2.5.2 测序 | 第23页 |
2.5.3 序列拼接 | 第23-24页 |
2.5.4 功能注释、分类和代谢途径分析 | 第24页 |
2.6 CDNA模板制备 | 第24-26页 |
2.6.1 总RNA的纯化及检测 | 第24-25页 |
2.6.2 CDNA模板合成 | 第25-26页 |
2.7 CSERF4、18、27、29和CSHDA3、7、8、17、18、21基因全长CDNA的克隆 | 第26-27页 |
2.8 CSERFS的氨基酸序列分析 | 第27页 |
2.8.1 CSERF氨基酸序列的同源性分析 | 第27页 |
2.8.2 CSERFS的系统进化分析 | 第27页 |
2.9 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第27-30页 |
2.10 CSERF4、18、27、29的转录激活分析 | 第30-32页 |
2.10.1 酵母菌株 | 第30页 |
2.10.2 载体构建 | 第30页 |
2.10.3 酵母感受态细胞的制备及PEG\LiAc介导的质粒转化 | 第30-32页 |
2.10.4 a-半乳糖苷酶(a-galactosidase)活性检测 | 第32页 |
2.11 酵母双杂 | 第32-33页 |
2.12 双分子荧光互补实验(BiFC) | 第33-35页 |
3 结果与分析 | 第35-57页 |
3.1 冷锻炼处理对冷藏黄瓜果实外观的影响 | 第35-36页 |
3.2 冷锻炼处理对冷藏黄瓜果实品质的影响 | 第36-38页 |
3.2.1 冷锻炼处理对冷藏黄瓜果实失重率的影响 | 第36-37页 |
3.2.2 冷锻炼处理对冷藏黄瓜果实冷害发生率和冷害指数的影响 | 第37-38页 |
3.3 冷锻炼处理对冷藏黄瓜果实生理变化的影响 | 第38-40页 |
3.3.1 冷锻炼处理对冷藏黄瓜果实相对电导率的影响 | 第38-39页 |
3.3.2 冷锻炼处理对冷藏黄瓜果实叶绿素含量和叶绿素荧光的影响 | 第39-40页 |
3.4 黄瓜果实总RNA的提取 | 第40-41页 |
3.5 黄瓜果实转录组测序结果分析 | 第41-47页 |
3.5.1 黄瓜果实转录组差异基因的聚类分析 | 第42-43页 |
3.5.2 黄瓜果实转录组的GO分类和KEGG分类 | 第43-45页 |
3.5.3 黄瓜果实转录组差异基因的维恩图分析及表达差异的CSERFS基因的筛选 | 第45-47页 |
3.6 黄瓜果实冷害过程中CSERFS和CSHDACS基因的表达特性分析 | 第47-50页 |
3.6.1 CSERF1-29和CSHDA1-21基因荧光引物的筛选 | 第47-48页 |
3.6.2 CSHSFS和CSHDAS在黄瓜果实冷害过程中的表达分析 | 第48-50页 |
3.7 CSERFS的序列分析 | 第50-53页 |
3.7.1CSERFS氨基酸序列的同源性分析 | 第50-52页 |
3.7.2 CSERF4、18、27、29氨基酸序列的基本特性 | 第52页 |
3.7.3 CSERF4、18、27、29的进化关系分析 | 第52-53页 |
3.8 CSERFS在酵母内的转录活性分析 | 第53-55页 |
3.9 CSERFS与CSHDAS的蛋白互作分析 | 第55-57页 |
3.9.1 酵母双杂交分析CSERFS与CSHDAS的蛋白互作 | 第55-56页 |
3.9.2 双分子荧光互补技术(BiFC)验证CSERF29与CSHDA18的蛋白互作 | 第56-57页 |
4 讨论 | 第57-60页 |
4.1 冷锻炼处理可以减轻黄瓜果实采后贮藏冷害 | 第57-58页 |
4.2 通过转录组测序获得黄瓜果实基因表达信息 | 第58-59页 |
4.3 CSERFS参与调控黄瓜果实采后贮藏冷害及其机制 | 第59-60页 |
5 结论 | 第60-61页 |
致谢 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-72页 |