| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 根结线虫的危害 | 第11-12页 |
| 1.2 根结线虫的防治 | 第12-13页 |
| 1.3 根结线虫效应子蛋白的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.3.1 改变植物细胞壁的结构 | 第14页 |
| 1.3.2 分子模拟寄主内源信号 | 第14-15页 |
| 1.3.3 抑制植物防御反应 | 第15-16页 |
| 1.3.4 调控寄主的转录 | 第16-17页 |
| 1.3.5 转录后修饰 | 第17页 |
| 1.3.6 未知功能的效应子蛋白 | 第17页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-40页 |
| 2.1 材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 供试线虫种群与植株 | 第19页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂与试剂盒 | 第19页 |
| 2.1.4 主要溶液与培养基配方 | 第19-21页 |
| 2.1.5 主要仪器与设备 | 第21页 |
| 2.1.6 主要软件与网络数据库 | 第21-22页 |
| 2.1.7 引物设计与合成 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-40页 |
| 2.2.1 供试番茄植株的培养 | 第22页 |
| 2.2.2 供试线虫的培养与收集 | 第22页 |
| 2.2.3 爪哇根结线虫总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.4 爪哇根结线虫总RNA反转录cDNA | 第23页 |
| 2.2.5 爪哇根结线虫Mj-msp33基因片段的同源克隆 | 第23-25页 |
| 2.2.5.1 PCR扩增Mj-msp33基因片段 | 第23-24页 |
| 2.2.5.2 PCR产物的纯化回收 | 第24-25页 |
| 2.2.5.3 回收的PCR产物连接pMD18-T载体 | 第25页 |
| 2.2.5.4 重组质粒的转化及筛选 | 第25页 |
| 2.2.6 爪哇根结线虫Mj-msp33基因全长的获得 | 第25-27页 |
| 2.2.6.1 5' RACE-PCR | 第25-26页 |
| 2.2.6.2 3' RACE-PCR | 第26-27页 |
| 2.2.6.3 Mj-msp33基因全长序列的扩增 | 第27页 |
| 2.2.6.4 重组质粒pMD18-T-Mj-msp33的提取 | 第27页 |
| 2.2.7 Mj-msp33在爪哇根结线虫中的原位杂交分析 | 第27-30页 |
| 2.2.7.1 原位杂交实验探针的制备 | 第27-29页 |
| 2.2.7.2 线虫的固定及处理 | 第29页 |
| 2.2.7.3 杂交实验 | 第29-30页 |
| 2.2.8 爪哇根结线虫Mj-msp33基因的龄期表达分析 | 第30-33页 |
| 2.2.8.1 爪哇根结线虫卵的收集 | 第30-31页 |
| 2.2.8.2 爪哇根结线虫侵染前二龄幼虫的收集 | 第31页 |
| 2.2.8.3 爪哇根结线虫侵染后2龄幼虫、3 龄幼虫和4龄幼虫的收集 | 第31页 |
| 2.2.8.4 爪哇根结线虫成熟雌虫的收集 | 第31页 |
| 2.2.8.5 爪哇根结线虫各龄期总RNA的提取 | 第31页 |
| 2.2.8.6 爪哇根结线虫各龄期cDNA的获得 | 第31-32页 |
| 2.2.8.7 qRT-PCR分析Mj-msp33在爪哇根结线虫不同发育阶段的表达水平 | 第32-33页 |
| 2.2.9 爪哇根结线虫Mj-msp33蛋白与拟南芥互作蛋白的初步鉴定 | 第33-40页 |
| 2.2.9.1 诱饵载体pGBKT7-Mj-msp33的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.9.2 酵母菌株AH109感受态的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.9.3 诱饵载体转化酵母菌株AH109 | 第35页 |
| 2.2.9.4 诱饵载体转化酵母菌株AH109阳性菌落的检测 | 第35-36页 |
| 2.2.9.5 诱饵载体毒性与自激活检测 | 第36页 |
| 2.2.9.6 酵母双杂交文库筛选 | 第36-37页 |
| 2.2.9.7 酵母阳性菌落的验证 | 第37-38页 |
| 2.2.9.8 酵母质粒的抽提 | 第38-39页 |
| 2.2.9.9 酵母质粒转化大肠杆菌DH5α | 第39页 |
| 2.2.9.10 诱饵载体与筛选到的潜在互作因子的共转化 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-54页 |
| 3.1 爪哇根结线虫Mj-msp33基因的克隆 | 第40-46页 |
| 3.1.1 同源克隆 | 第40页 |
| 3.1.2 RACE实验 | 第40-41页 |
| 3.1.3 爪哇根结线虫Mj-msp33基因全长的扩增 | 第41-43页 |
| 3.1.4 同源性分析 | 第43页 |
| 3.1.5 理化性质分析 | 第43-44页 |
| 3.1.6 爪哇根结线虫Mj-msp33蛋白结构预测 | 第44-46页 |
| 3.1.6.1 Mj-msp33蛋白信号肽预测及跨膜结构域预测 | 第44-45页 |
| 3.1.6.2 Mj-msp33蛋白亚细胞定位预测 | 第45页 |
| 3.1.6.3 Mj-msp33蛋白磷酸化位点预测 | 第45-46页 |
| 3.2 Mj-msp33在爪哇根结线虫中的表达定位分析 | 第46-48页 |
| 3.2.1 探针的制备 | 第46-48页 |
| 3.2.2 原位杂交实验 | 第48页 |
| 3.3 爪哇根结线虫Mj-msp33基因的龄期表达分析 | 第48-49页 |
| 3.4 爪哇根结线虫Mj-msp33蛋白与拟南芥互作蛋白的初步鉴定 | 第49-54页 |
| 3.4.1 诱饵载体pGBKT7-Mj-msp33的构建 | 第49-51页 |
| 3.4.2 诱饵载体pGBKT7-Mj-msp33转化酵母菌株AH109 | 第51-52页 |
| 3.4.3 拟南芥互作蛋白的初步筛选 | 第52-53页 |
| 3.4.4 诱饵蛋白与捕获蛋白共转化酵母细胞 | 第53-54页 |
| 4 结论与讨论 | 第54-59页 |
| 4.1 结论 | 第54页 |
| 4.2 讨论 | 第54-58页 |
| 4.2.1 Mj-msp33基因全长的获得 | 第54-55页 |
| 4.2.2 Mj-msp33蛋白是爪哇根结线虫分泌蛋白 | 第55页 |
| 4.2.3 Mj-msp33蛋白定位在植物的细胞核 | 第55页 |
| 4.2.4 磷酸化修饰 | 第55页 |
| 4.2.5 Mj-msp33在爪哇根结线虫pre-J2的亚腹食道腺中特异表达 | 第55-56页 |
| 4.2.6 Mj-msp33在爪哇根结线虫侵染前和侵染早期阶段特异表达 | 第56页 |
| 4.2.7 Mj-msp33蛋白与拟南芥GDPD蛋白存在互作关系 | 第56-58页 |
| 4.3 本论文还需进一步解决的问题 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-71页 |
