| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 第一章 前言 | 第11-19页 |
| 1 干细胞简介 | 第11-12页 |
| 2 干细胞研究发展简史 | 第12-13页 |
| 3 mESCs、hESCs与mEpiSCs三者之间的比较 | 第13-15页 |
| 4 mEpiSCs的培养条件 | 第15-16页 |
| 5 IWR1在mEpiSCs/hESCs自我更新中的研究进展 | 第16-17页 |
| 6 Foxd3基因的筛选 | 第17-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-47页 |
| 1 材料 | 第19-20页 |
| 2 细胞常规培养 | 第20-23页 |
| 2.1 mEpiSCs的获取 | 第20-21页 |
| 2.2 mEpiSCs的传代和培养 | 第21-22页 |
| 2.3 细胞计数 | 第22页 |
| 2.4 细胞冻存 | 第22-23页 |
| 2.5 细胞复苏 | 第23页 |
| 3 细胞状态检测 | 第23-29页 |
| 3.1 形态观察 | 第23-24页 |
| 3.2 免疫荧光 | 第24页 |
| 3.3 Western blot | 第24-27页 |
| 3.4 荧光实时定量PCR(qRT-PCR) | 第27-29页 |
| 4 培养条件优化 | 第29-30页 |
| 4.1 撤除1个因子的培养条件 | 第29页 |
| 4.2 验证IY条件对维持mEpiSCs的作用 | 第29-30页 |
| 5 筛选目的基因 | 第30-31页 |
| 5.1 分条件培养细胞 | 第30页 |
| 5.2 Microarray(基因芯片)分析 | 第30-31页 |
| 5.3 筛选目的基因 | 第31页 |
| 6 反向验证Foxd3与IWR1的相关性 | 第31-32页 |
| 6.1 分条件刺激细胞 | 第31页 |
| 6.2 qRT-PCR检测Foxd3的表达 | 第31-32页 |
| 7 在上胚层干细胞中过表达Foxd3 | 第32-40页 |
| 7.1 构建过表达载体系统 | 第32-38页 |
| 7.2 建立稳定的过表达细胞系 | 第38-39页 |
| 7.3 去IWR1条件下培养Foxd3过表达细胞 | 第39-40页 |
| 8 在上胚层干细胞中下调Foxd3 | 第40-47页 |
| 8.1 构建针对目的基因的pLKO.1慢病毒载体 | 第40-44页 |
| 8.2 包装病毒颗粒 | 第44页 |
| 8.3 建立稳定的Foxd3-shRNA细胞系 | 第44-45页 |
| 8.4 Foxd3-shRNA细胞状态检测 | 第45-47页 |
| 第三章 结果 | 第47-58页 |
| 1 mEpiSCs的获取 | 第47页 |
| 2 培养条件优化 | 第47-50页 |
| 3 Microarray分析与靶基因筛选 | 第50-51页 |
| 4 Foxd3与IWR1相关性验证 | 第51-52页 |
| 5 Foxd3稳定表达细胞系的建立 | 第52-53页 |
| 6 去IWR1条件下培养Foxd3过表达细胞 | 第53-55页 |
| 7 Foxd3稳定干扰细胞系的建立 | 第55-56页 |
| 8 下调Foxd3对上胚层干细胞的影响 | 第56-58页 |
| 第四章 讨论 | 第58-61页 |
| 附录 | 第61-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70-73页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第73页 |