| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第13-20页 |
| 1.1 鸡球虫病研究进展 | 第13-16页 |
| 1.1.1 鸡球虫病流行情况 | 第13页 |
| 1.1.2 鸡球虫生活史 | 第13-14页 |
| 1.1.3 鸡抗球虫免疫应答 | 第14-16页 |
| 1.1.4 DNA疫苗在球虫免疫中的应用 | 第16页 |
| 1.2 Hsp90研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.1 Hsp90发现与功能 | 第16-17页 |
| 1.2.2 Hsp90在原虫中的研究进展 | 第17页 |
| 1.3 鸡IL-18研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.1 鸡IL-18研究概况 | 第17-18页 |
| 1.3.2 鸡IL-18抗球虫免疫佐剂作用 | 第18页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 实验动物与虫种 | 第20页 |
| 2.1.2 载体、菌株与细胞 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 主要试剂配方 | 第20-23页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-39页 |
| 2.2.1 堆型艾美耳球虫Hsp90基因的克隆与鉴定 | 第23-27页 |
| 2.2.2 Hsp90的原核表达及鉴定 | 第27-31页 |
| 2.2.3 Hsp90多克隆抗体的制备及其生物学活性测定 | 第31-32页 |
| 2.2.4 Hsp90真核表达质粒的构建、鉴定及体外瞬时转染 | 第32-33页 |
| 2.2.5 真核表达质粒的大量制备与纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.6 实验动物分组与免疫 | 第34-35页 |
| 2.2.7 淋巴细胞增殖实验 | 第35-37页 |
| 2.2.8 免疫及攻虫后雏鸡增重效果评价 | 第37页 |
| 2.2.9 十二指肠病变计分 | 第37页 |
| 2.2.10抗球虫指数计算 | 第37-38页 |
| 2.2.11 ELISA检测血液中抗Hsp90的Ig G抗体 | 第38页 |
| 2.2.12数据处理 | 第38-39页 |
| 3 结果 | 第39-59页 |
| 3.1 堆型艾美耳球虫Hsp90基因的克隆与鉴定 | 第39-41页 |
| 3.1.1 Hsp90基因的克隆 | 第39页 |
| 3.1.2 p MD18-T-Hsp90重组质粒鉴定 | 第39-41页 |
| 3.2 兔抗Hsp90多克隆抗体的制备 | 第41-45页 |
| 3.2.1 p ET30a-Hsp90重组质粒的构建与鉴定 | 第41页 |
| 3.2.2 表达产物的SDS-PAGE鉴定 | 第41-43页 |
| 3.2.3 表达产物的Western blot检测 | 第43页 |
| 3.2.4 Hsp90重组蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| 3.2.5 多克隆抗体的反应性和特异性检测 | 第44-45页 |
| 3.3 重组真核表达质粒的构建和鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3.1 p VAX-Hsp90的酶切鉴定 | 第45页 |
| 3.3.2 p VAX-IL18-Hsp90的PCR和酶切鉴定 | 第45页 |
| 3.3.3 重组真核表达质粒的测序 | 第45-46页 |
| 3.4 p VAX-Hsp90和p VAX-IL18-Hsp90的体外瞬时表达 | 第46-48页 |
| 3.5 雏鸡免疫器官及外周血T淋巴细胞增殖功能变化 | 第48-51页 |
| 3.5.1 胸腺T淋巴细胞增殖功能变化 | 第48-49页 |
| 3.5.2 脾脏T淋巴细胞增殖功能变化 | 第49-50页 |
| 3.5.3 外周血T淋巴细胞增殖功能变化 | 第50-51页 |
| 3.6 雏鸡免疫器官及外周血B淋巴细胞增殖功能变化 | 第51-53页 |
| 3.6.1 脾脏B淋巴细胞增殖功能变化 | 第51-52页 |
| 3.6.2 外周血B淋巴细胞增殖功能变化 | 第52-53页 |
| 3.7 Hsp90刺激雏鸡免疫器官和外周血淋巴细胞增殖功能变化 | 第53-56页 |
| 3.7.1 Hsp90刺激胸腺淋巴细胞增殖功能变化 | 第53-54页 |
| 3.7.2 Hsp90刺激脾脏淋巴细胞增殖功能变化 | 第54-55页 |
| 3.7.3 Hsp90刺激外周血淋巴细胞增殖功能变化 | 第55-56页 |
| 3.8 外周血中Ig G抗体含量动态变化 | 第56-57页 |
| 3.9 重组真核表达质粒抗球虫保护效果 | 第57-59页 |
| 3.9.1 雏鸡增重情况 | 第57页 |
| 3.9.2 克粪便卵囊排出数与十二指肠病变计分 | 第57-58页 |
| 3.9.3 重组真核表达质粒的抗球虫指数 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-63页 |
| 4.1 堆型艾美耳球虫Hsp90抗原性研究 | 第59-60页 |
| 4.2 Ch IL-18对DNA疫苗的佐剂样作用 | 第60页 |
| 4.3 重组真核表达质粒诱导细胞免疫保护水平 | 第60-61页 |
| 4.3.1 T淋巴细胞增殖功能影响 | 第60-61页 |
| 4.3.2 B淋巴细胞增殖功能影响 | 第61页 |
| 4.3.3 Hsp90刺激后淋巴细胞增殖功能变化 | 第61页 |
| 4.4 重组真核表达质粒诱导体液免疫保护水平 | 第61-62页 |
| 4.5 重组DNA疫苗抗球虫免疫保护效果 | 第62-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第70页 |
