| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-31页 |
| 1.1 恶性肿瘤 | 第14页 |
| 1.2 肿瘤的免疫治疗 | 第14-18页 |
| 1.2.1 自体免疫细胞疗法 | 第14-16页 |
| 1.2.2 细胞因子疗法 | 第16-17页 |
| 1.2.3 单克隆抗体疗法 | 第17-18页 |
| 1.3 肿瘤疫苗 | 第18-25页 |
| 1.3.1 肿瘤疫苗的分类 | 第19-22页 |
| 1.3.1.1 肿瘤细胞疫苗 | 第19页 |
| 1.3.1.2 肿瘤多肽疫苗 | 第19-21页 |
| 1.3.1.3 基因疫苗 | 第21页 |
| 1.3.1.4 树突状细胞疫苗 | 第21-22页 |
| 1.3.2 肿瘤疫苗抗原 | 第22-25页 |
| 1.3.2.1 肿瘤生物标志物 | 第22页 |
| 1.3.2.2 独特性肿瘤抗原 | 第22-25页 |
| 1.4 肿瘤疫苗的作用机制 | 第25-27页 |
| 1.4.1 体液免疫机制 | 第25-26页 |
| 1.4.2 细胞免疫机制 | 第26-27页 |
| 1.4.2.1 T细胞 | 第26页 |
| 1.4.2.2 NK细胞 | 第26-27页 |
| 1.4.2.3 巨噬细胞 | 第27页 |
| 1.5 肿瘤新抗原的筛选 | 第27-29页 |
| 1.5.1 传统的筛选方法 | 第27-28页 |
| 1.5.1.1 依赖于T细胞的肿瘤抗原筛选 | 第27-28页 |
| 1.5.1.2 SEREX方法筛选肿瘤抗原 | 第28页 |
| 1.5.2 噬菌体肽文库筛选 | 第28-29页 |
| 1.5.3 肿瘤基因表达谱 | 第29页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第29-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-50页 |
| 2.1 材料 | 第31-34页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第31页 |
| 2.1.2 试剂盒 | 第31-32页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第32页 |
| 2.1.4 实验菌株和细胞株 | 第32页 |
| 2.1.5 实验动物 | 第32页 |
| 2.1.6 主要溶液配制 | 第32-34页 |
| 2.2 方法 | 第34-50页 |
| 2.2.1 S180 肉瘤组织总RNA的提取 | 第34页 |
| 2.2.2 第一链cDNA的合成 | 第34-35页 |
| 2.2.3 随机引物的筛选 | 第35-36页 |
| 2.2.4 重组表达质粒pET-28a-HSP65 的构建 | 第36-38页 |
| 2.2.4.1 引物设计及合成 | 第36页 |
| 2.2.4.2 HSP65 基因的扩增 | 第36-37页 |
| 2.2.4.3 重组表达质粒的构建 | 第37-38页 |
| 2.2.4.4 HSP65 诱导表达 | 第38页 |
| 2.2.5 S180 肉瘤基因随机表达库的构建 | 第38-40页 |
| 2.2.5.1 扩增目的基因群的改进引物设计及合成 | 第38-39页 |
| 2.2.5.2 目的基因群M序列的扩增 | 第39页 |
| 2.2.5.3 表达质粒pET-28a-HSP65-M的构建 | 第39页 |
| 2.2.5.4 pET-28a-HSP65-M转化子克隆及建库 | 第39-40页 |
| 2.2.6 从S180 肉瘤基因随机表达库中筛选抗肿瘤活性的转化子 | 第40-42页 |
| 2.2.6.1 SDS-PAGE分析筛选 | 第40页 |
| 2.2.6.2 转化子对S180 肉瘤免疫治疗效果的测定 | 第40-42页 |
| 2.2.6.3 第二次筛选 | 第42页 |
| 2.2.7 重组蛋白免疫抗瘤效果的验证 | 第42-44页 |
| 2.2.7.1 重组蛋白HSP65、HSP-A5 和A5 的表达与纯化 | 第42-43页 |
| 2.2.7.2 免疫小鼠 | 第43-44页 |
| 2.2.7.3 组织病理切片 | 第44页 |
| 2.2.8 蛋白A5 抗肿瘤机理的研究 | 第44-46页 |
| 2.2.8.1 血清抗原特异性IgG抗体效价的检测 | 第44页 |
| 2.2.8.2 抗血清的过继免疫治疗 | 第44-45页 |
| 2.2.8.3 T淋巴细胞TNF-α 和IFN-γ 的检测 | 第45页 |
| 2.2.8.4 细胞毒T淋巴细胞杀伤活性的检测 | 第45-46页 |
| 2.2.8.5 MTT法检测抗原特异性淋巴细胞的增殖 | 第46页 |
| 2.2.9 检测蛋白A5 与PCMT1 的交叉免疫反应 | 第46-50页 |
| 2.2.9.1 蛋白PCMT1 的表达与纯化 | 第46-47页 |
| 2.2.9.2 蛋白PCMT1 免疫小鼠 | 第47页 |
| 2.2.9.3 Western Blotting | 第47-48页 |
| 2.2.9.4 ADCC作用 | 第48页 |
| 2.2.9.5 CDC作用 | 第48页 |
| 2.2.9.6 S180 肉瘤细胞免疫荧光染色 | 第48-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-73页 |
| 3.1 S180 肉瘤组织总RNA的提取 | 第50页 |
| 3.2 反转录合成第一链cDNA | 第50-51页 |
| 3.3 随机引物的筛选 | 第51-52页 |
| 3.4 重组表达质粒pET-28a-HSP65 的构建 | 第52-55页 |
| 3.5 S180 肉瘤基因随机表达库的构建 | 第55-56页 |
| 3.6 从S180 肉瘤表达库中筛选免疫抗瘤活性的转化子 | 第56-60页 |
| 3.6.1 SDS-PAGE分析筛选阳性转化子 | 第56-57页 |
| 3.6.2 根据免疫抗瘤效果筛选阳性转化子 | 第57-60页 |
| 3.7 重组蛋白免疫抗瘤效果的验证 | 第60-64页 |
| 3.7.1 重组蛋白HSP65、HSP-A5 和A5 的表达与纯化 | 第60-61页 |
| 3.7.2 抗原蛋白HSP-A5 和A5 的免疫抗瘤效果 | 第61-64页 |
| 3.8 免疫抗瘤机制的初步研究 | 第64-73页 |
| 3.8.1 体液免疫反应 | 第64-66页 |
| 3.8.1.1 免疫小鼠血清中抗体IgG效价的测定 | 第64-65页 |
| 3.8.1.2 抗血清对S180 肉瘤的过继免疫治疗效果 | 第65-66页 |
| 3.8.2 细胞免疫反应 | 第66-68页 |
| 3.8.2.1 T淋巴细胞胞内TNF-α 和IFN-γ 的检测 | 第66-67页 |
| 3.8.2.2 细胞毒T淋巴细胞杀伤活性的检测 | 第67页 |
| 3.8.2.3 抗原A5 特异性淋巴细胞的增殖 | 第67页 |
| 3.8.2.4 蛋白HSP-A5 和A5 对健康小鼠的毒性检测 | 第67-68页 |
| 3.8.3 蛋白A5 与PCMT1 的交叉免疫反应的检测 | 第68-73页 |
| 3.8.3.1 蛋白PCMT1 表达与纯化 | 第68-70页 |
| 3.8.3.2 Western Blotting | 第70-71页 |
| 3.8.3.3 ADCC和CDC作用 | 第71页 |
| 3.8.3.4 S180 肉瘤细胞免疫荧光染色 | 第71-73页 |
| 4 结论与讨论 | 第73-77页 |
| 4.1 结论 | 第73页 |
| 4.2 讨论 | 第73-75页 |
| 4.3 创新点 | 第75-76页 |
| 4.4 展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
