| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-24页 |
| 1.1 芳香羟胺的可控合成 | 第11-12页 |
| 1.1.1 芳香羟胺的应用 | 第11页 |
| 1.1.2 芳香羟胺的制备 | 第11-12页 |
| 1.1.3 生物催化法制备芳香羟胺 | 第12页 |
| 1.2 细菌硝基还原酶 | 第12-17页 |
| 1.2.1 细菌硝基还原酶及应用 | 第12页 |
| 1.2.2 细菌硝基还原酶的分类 | 第12-13页 |
| 1.2.3 细菌硝基还原酶的催化机制 | 第13-14页 |
| 1.2.4 细菌硝基还原酶的结构特征 | 第14-15页 |
| 1.2.5 大肠杆菌硝基还原酶NfsA和NfsB | 第15-17页 |
| 1.3 硝基还原酶的辅酶偏好性 | 第17-22页 |
| 1.3.1 细菌氧化还原酶辅酶偏好性 | 第17-18页 |
| 1.3.2 辅酶NADH和辅酶NADPH的结构和功能 | 第18-19页 |
| 1.3.3 细菌氧化还原酶与NAD(P)H的作用关系 | 第19-20页 |
| 1.3.4 NfsA和NfsB的辅酶偏好性 | 第20-22页 |
| 1.4 本论文的研究意义与内容 | 第22-24页 |
| 1.4.1 选题依据 | 第22页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第22-24页 |
| 2 硝基还原酶NfsA和NfsB催化二硝基苯底物可控合成芳香羟胺 | 第24-39页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 NfsA,NfsB和NfsB突变体F123A的重组表达 | 第24页 |
| 2.2.2 蛋白的表达纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.3 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第25页 |
| 2.2.4 Western Blot验证 | 第25页 |
| 2.2.5 酶的FMN孵育 | 第25-26页 |
| 2.2.6 蛋白浓度以及酶活性测定 | 第26页 |
| 2.2.7 HPLC分析NfsA、NfsB对二硝基苯底物还原 | 第26页 |
| 2.2.8 质谱分析酶还原1,2-DNB,1,3-DNB,1,4-DNB的产物 | 第26-27页 |
| 2.2.9 NfsA,NfsB及其突变体F123A的动力学常数测定 | 第27页 |
| 2.2.10 NfsA与模式二硝基苯底物的分子对接 | 第27-28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-36页 |
| 2.3.1 NfsA,NfsB的重组表达及分离纯化 | 第28-29页 |
| 2.3.2 NfsA和NfsB对二硝基苯底物的活性测定 | 第29-31页 |
| 2.3.3 NfsA和NfsB对二硝基苯底物还原的HPLC分析 | 第31-33页 |
| 2.3.4 质谱分析NfsA和NfsB对二硝基苯底物的还原产物 | 第33-34页 |
| 2.3.5 NfsA和NfsB及NfsB突变体F123A对二硝基苯底物的动力学常数测定 | 第34-36页 |
| 2.4 分析讨论 | 第36-38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-39页 |
| 3 NfsA和NfsB催化含其他取代基的二硝基苯可控合成芳香羟胺 | 第39-47页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第39-41页 |
| 3.2.1 NfsA和NfsB对含其他取代基的二硝基苯化合物的酶活性测定 | 第39页 |
| 3.2.2 NfsA和NfsB催化含其他取代基的二硝基苯底物的HPLC分析 | 第39-40页 |
| 3.2.3 质谱分析酶还原3,5-DNA和3,5-DNT的还原产物 | 第40页 |
| 3.2.4 NfsA,NfsB及其突变体F123A的动力学常数测定 | 第40-41页 |
| 3.3 实验结果 | 第41-46页 |
| 3.3.1 NfsA和NfsB对含其他取代基的二硝基苯底物的活性测定 | 第41页 |
| 3.3.2 HPLC分析NfsA和NfsB对含其他取代基的二硝基苯底物的还原 | 第41-42页 |
| 3.3.3 NfsA和NfsB对二硝基苯底物还原产物质的谱分析 | 第42-43页 |
| 3.3.4 NfsA,NfsB及NfsB F123A对含其他取代基二硝基苯底物的动力学常数测定 | 第43-46页 |
| 3.4 分析讨论 | 第46页 |
| 3.5 本章小结 | 第46-47页 |
| 4 NfsA和NfsB的辅酶偏好性研究 | 第47-57页 |
| 4.1 引言 | 第47页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第47-49页 |
| 4.2.1 GroupA和GroupB家族酶的序列比对 | 第47页 |
| 4.2.2 NfsA,NfsB的突变体表达和分离纯化 | 第47-49页 |
| 4.2.3 NfsA,NfsB突变体利用NAD(P)H的酶活性检测 | 第49页 |
| 4.3 实验结果 | 第49-54页 |
| 4.3.1 GroupA和GroupB家族酶的序列比对及结构分析 | 第49-51页 |
| 4.3.2 NfsA和NfsB突变体酶的诱导表达及分离纯化 | 第51-52页 |
| 4.3.3 NfsA和NfsB突变体酶利用辅酶NAD(P)H的酶活性分析 | 第52-54页 |
| 4.4 分析讨论 | 第54-56页 |
| 4.5 本章小结 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 附录A 缩略词表 | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
