| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-20页 |
| 1.1 酱油 | 第8-9页 |
| 1.1.1 酱油的起源和发展 | 第8-9页 |
| 1.1.2 酱油的主要工艺 | 第9页 |
| 1.2 酿造微生物 | 第9-14页 |
| 1.2.1 W303 | 第10-11页 |
| 1.2.2 S酵母 | 第11-13页 |
| 1.2.3 T酵母 | 第13-14页 |
| 1.3 SPT15 | 第14-15页 |
| 1.4 PCR技术 | 第15-18页 |
| 1.4.1 PCR技术 | 第15-16页 |
| 1.4.2 易错PCR技术 | 第16-18页 |
| 1.4.3 易错PCR研究进展 | 第18页 |
| 1.5 本论文研究的意义及内容 | 第18-20页 |
| 1.5.1 本论文研究目的及意义 | 第18页 |
| 1.5.2 本论文研究内容 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 菌种及质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第21-22页 |
| 2.1.4 培养基与溶液 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-38页 |
| 2.2.1 酵母染色体DNA的快速分离 | 第23页 |
| 2.2.2 凝胶电泳法检测DNA | 第23-24页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.4 PCR产物纯化方法 | 第25页 |
| 2.2.5 PCR反应条件的优化 | 第25-29页 |
| 2.2.6 酶切反应 | 第29-31页 |
| 2.2.7 连接反应 | 第31页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.9 质粒的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.10 蓝白斑筛选 | 第33页 |
| 2.2.11 DNA片段的回收纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.12 酵母细胞的化学转化法 | 第34页 |
| 2.2.13 酵母细胞的电转化法 | 第34-35页 |
| 2.2.14 影印平板法 | 第35页 |
| 2.2.15 Dilution稀释法 | 第35页 |
| 2.2.16 酱油的制作工艺 | 第35-36页 |
| 2.2.17 氨基酸态氮的测定 | 第36-38页 |
| 3 结果与讨论 | 第38-53页 |
| 3.1 易错PCR反应 | 第38-43页 |
| 3.1.1 改变退火温度 | 第38-39页 |
| 3.1.2 改变Mg~(2+)浓度 | 第39页 |
| 3.1.3 改变4种dNTP的浓度比例 | 第39-43页 |
| 3.2 SPT15基因突变库的构建 | 第43-47页 |
| 3.2.1 质粒YEplac 195-P的构建 | 第43-45页 |
| 3.2.2 YEplac195-P-T的构建 | 第45页 |
| 3.2.3 YEplac195-P-T-SPT15 | 第45-47页 |
| 3.3 筛选优势菌株 | 第47-51页 |
| 3.3.1 W303+G菌株Dilution实验 | 第48页 |
| 3.3.2 双酶切验证结果 | 第48-49页 |
| 3.3.3 WM2+G菌株Dilution实验 | 第49页 |
| 3.3.4 PCR验证结果 | 第49-51页 |
| 3.4 酱油发酵 | 第51-53页 |
| 4 结论 | 第53-54页 |
| 5 展望 | 第54-55页 |
| 6 参考文献 | 第55-64页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文等情况 | 第64-65页 |
| 8 致谢 | 第65页 |