| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第16-36页 |
| 1.1 腈水解酶 | 第16-22页 |
| 1.1.1 腈水解酶的简介 | 第16-19页 |
| 1.1.2 腈水解酶的结构及其催化机制 | 第19-22页 |
| 1.2 腈水解酶的分子改造 | 第22-25页 |
| 1.2.1 腈水解酶的理性设计 | 第22-23页 |
| 1.2.2 腈水解酶的非理性设计 | 第23-25页 |
| 1.3 腈水解酶的性质 | 第25-31页 |
| 1.3.1 腈水解酶的立体选择性 | 第25-29页 |
| 1.3.2 腈水解酶的区域选择性 | 第29-30页 |
| 1.3.3 腈水解酶的化学选择性 | 第30-31页 |
| 1.4 腈水解酶的应用 | 第31-32页 |
| 1.4.1 腈水解酶在有机合成方面的应用 | 第32页 |
| 1.4.2 腈水解酶在生物降解方面的应用 | 第32页 |
| 1.5 腈水解酶的固定化 | 第32-33页 |
| 1.6 本论文选题的背景意义和研究内容 | 第33-36页 |
| 1.6.1 课题的背景意义 | 第33-35页 |
| 1.6.2 课题的研究内容 | 第35-36页 |
| 第二章 立体选择性腈水解酶的筛选、分子改造及酶学性质 | 第36-53页 |
| 2.1 前言 | 第36页 |
| 2.2 材料和方法 | 第36-41页 |
| 2.2.1 菌种 | 第36页 |
| 2.2.2 培养基成分 | 第36-37页 |
| 2.2.3 所用工具酶与试剂 | 第37页 |
| 2.2.4 重要实验仪器 | 第37页 |
| 2.2.5 立体选择性腈水解酶菌株的筛选 | 第37页 |
| 2.2.6 突变库的建立 | 第37-38页 |
| 2.2.7 高通量筛选方法 | 第38-39页 |
| 2.2.8 突变腈水解酶序列测定 | 第39页 |
| 2.2.9 重组腈水解酶的分离纯化 | 第39-40页 |
| 2.2.10 重组腈水解酶的最适p H与pH稳定性研究 | 第40-41页 |
| 2.2.11 重组腈水解酶的最适温度与温度稳定性研究 | 第41页 |
| 2.2.12 重组腈水解酶的圆二色谱分析 | 第41页 |
| 2.2.13 重组腈水解酶的同源建模及分子对接研究 | 第41页 |
| 2.3 结果和讨论 | 第41-51页 |
| 2.3.1 立体选择性腈水解酶的筛选 | 第41-43页 |
| 2.3.2 高通量筛选模型建立 | 第43页 |
| 2.3.3 WtNit腈水解酶突变体的筛选 | 第43-44页 |
| 2.3.4 腈水解酶纯酶的获得 | 第44-45页 |
| 2.3.5 pH对重组腈水解酶活力的影响 | 第45-46页 |
| 2.3.6 温度对重组腈水解酶活力的影响 | 第46-47页 |
| 2.3.7 重组腈水解酶的圆二色谱分析 | 第47-48页 |
| 2.3.8 重组腈水解酶的动力学分析 | 第48-49页 |
| 2.3.9 重组腈水解酶的同源建模与分子对接 | 第49-51页 |
| 2.4 本章小结 | 第51-53页 |
| 第三章 Mut3催化(R,S)-扁桃腈生产(R)-扁桃酸的应用 | 第53-71页 |
| 3.1 前言 | 第53页 |
| 3.2 材料和方法 | 第53-55页 |
| 3.2.1 菌种与材料 | 第53-54页 |
| 3.2.2 培养基 | 第54页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第54页 |
| 3.2.4 重组腈水解酶催化扁桃腈的进程研究 | 第54页 |
| 3.2.5 Mut3全细胞催化扁桃腈的分批补料研究 | 第54页 |
| 3.2.6 Mut3在发酵罐中的发酵培养 | 第54-55页 |
| 3.2.7 Mut3催化扁桃腈生产(R)-扁桃酸的放大研究 | 第55页 |
| 3.2.8 产品(R)-扁桃酸的鉴定 | 第55页 |
| 3.3 结果和讨论 | 第55-70页 |
| 3.3.1 全细胞催化扁桃腈的进程研究 | 第55-56页 |
| 3.3.2 分批补料扁桃腈生产(R)-扁桃酸 | 第56-57页 |
| 3.3.3 Mut3在发酵罐中的发酵培养 | 第57-58页 |
| 3.3.4 700 L发酵罐中发酵液催化扁桃腈生产(R)-扁桃酸 | 第58页 |
| 3.3.5 7000 L发酵罐中发酵液催化扁桃腈生产(R)-扁桃酸 | 第58-59页 |
| 3.3.6 20000 L发酵罐中发酵液催化扁桃腈生产(R)-扁桃酸 | 第59-60页 |
| 3.3.7 (R)-扁桃酸的分离优化 | 第60-64页 |
| 3.3.8 400 L反应液中(R)-扁桃酸的分离 | 第64-65页 |
| 3.3.9 产品(R)-扁桃酸的鉴定 | 第65-70页 |
| 3.4 本章小结 | 第70-71页 |
| 第四章 戊二醛用于腈水解酶固定化及其在反应器中的研究 | 第71-93页 |
| 4.1 前言 | 第71-72页 |
| 4.2 材料与方法 | 第72-78页 |
| 4.2.1 菌种与材料 | 第72页 |
| 4.2.2 活性测定与分析方法 | 第72页 |
| 4.2.3 固定化方法的筛选 | 第72-75页 |
| 4.2.4 固定化细胞的操作稳定性 | 第75页 |
| 4.2.5 扫描电镜准备 | 第75页 |
| 4.2.6 温度和pH对固定化细胞和游离细胞的影响 | 第75页 |
| 4.2.7 储藏稳定性 | 第75页 |
| 4.2.8 细胞催化扁桃腈生产(R)-扁桃酸的研究 | 第75-76页 |
| 4.2.9 固定化细胞催化生产(R)-扁桃酸的分批补料研究 | 第76页 |
| 4.2.10 固定化细胞的准备 | 第76页 |
| 4.2.11 底物浓度对初始速率的影响 | 第76页 |
| 4.2.12 反应器中(R)-扁桃酸的半连续生产 | 第76-77页 |
| 4.2.13 反应器中(R)-扁桃酸的半连续生产研究 | 第77页 |
| 4.2.14 反应器结构对产率的影响 | 第77-78页 |
| 4.2.15 反应器的操作稳定性研究 | 第78页 |
| 4.3 结果和讨论 | 第78-91页 |
| 4.3.1 固定化方法的选择 | 第78-80页 |
| 4.3.2 固定化细胞的操作稳定性 | 第80-82页 |
| 4.3.3 温度和pH对固定化细胞催化活力的影响 | 第82-83页 |
| 4.3.4 储藏稳定性研究 | 第83-84页 |
| 4.3.5 生物催化扁桃腈的研究 | 第84-85页 |
| 4.3.6 扁桃腈的分批补料研究 | 第85页 |
| 4.3.7 固定化细胞的准备 | 第85-86页 |
| 4.3.8 底物浓度对初始速率的影响 | 第86-87页 |
| 4.3.9 固定化细胞的量对初始速率的影响 | 第87-88页 |
| 4.3.10 反应器的高径比（H/D）对初始速率的影响 | 第88-89页 |
| 4.3.11 底物补加流速对初始速率的影响 | 第89页 |
| 4.3.12 反应器中(R)-扁桃酸的生产进程研究 | 第89-90页 |
| 4.3.13 反应器结构对产率的影响 | 第90-91页 |
| 4.3.14 反应器的操作稳定性研究 | 第91页 |
| 4.4 本章小结 | 第91-93页 |
| 第五章 三羟甲基磷用于腈水解酶的固定化 | 第93-104页 |
| 5.1 前言 | 第93-94页 |
| 5.2 材料和方法 | 第94-96页 |
| 5.2.1 菌种与材料 | 第94页 |
| 5.2.2 培养基与培养条件 | 第94页 |
| 5.2.3 细胞的固定化 | 第94-95页 |
| 5.2.4 温度和pH对固定化细胞活力的影响 | 第95页 |
| 5.2.5 (R,S)-扁桃腈生产(R)-扁桃酸的生物转化 | 第95页 |
| 5.2.6 固定化细胞的操作稳定性研究 | 第95页 |
| 5.2.7 固定化细胞的活力分析与检测方法 | 第95-96页 |
| 5.3 结果和讨论 | 第96-103页 |
| 5.3.1 固定化方法的筛选与比较 | 第96页 |
| 5.3.2 温度和pH对催化活力的影响 | 第96-98页 |
| 5.3.3 底物浓度对固定化细胞催化活力的影响 | 第98-99页 |
| 5.3.4 固定化细胞催化(R,S)-扁桃腈的进程研究 | 第99-101页 |
| 5.3.5 固定化细胞催化(R,S)-扁桃腈的分批补料进程研究 | 第101页 |
| 5.3.6 固定化细胞的操作稳定性研究 | 第101-103页 |
| 5.4 本章小结 | 第103-104页 |
| 第六章 结论与展望 | 第104-108页 |
| 6.1 结论 | 第104-106页 |
| 6.2 论文创新之处 | 第106-107页 |
| 6.3 展望 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-124页 |
| 攻读博士期间发表论文与申请专利 | 第124-125页 |
| 致谢 | 第125页 |
