| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 革兰氏阴性菌的类脂A | 第8-11页 |
| 1.1.1 类脂A的结构及合成途径 | 第8-9页 |
| 1.1.2 类脂A的次级酰基转移酶 | 第9-11页 |
| 1.2 恶臭假单胞菌KT2442 | 第11-12页 |
| 1.2.1 恶臭假单胞菌与环境耐受性 | 第11页 |
| 1.2.2 恶臭假单胞菌的应用 | 第11-12页 |
| 1.3 立题背景和意义 | 第12页 |
| 1.4 课题研究方案与目标 | 第12-14页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第14-23页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-16页 |
| 2.1.1 实验菌株、质粒及引物 | 第14-15页 |
| 2.1.2 培养基及培养条件 | 第15页 |
| 2.1.3 主要试剂及工具酶 | 第15-16页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第16页 |
| 2.2 分子生物学实验操作 | 第16-20页 |
| 2.2.1 基因组DNA及质粒提取 | 第16页 |
| 2.2.2 PCR反应 | 第16-17页 |
| 2.2.3 质粒和DNA片段的酶切及连接 | 第17页 |
| 2.2.4 P. putida感受态细胞制备 | 第17页 |
| 2.2.5 P. putida感受态细胞的转化 | 第17-18页 |
| 2.2.6 P. putida KT2442敲除突变株的构建 | 第18-19页 |
| 2.2.7 P. putida表达菌株的构建 | 第19页 |
| 2.2.8 RT-PCR分析 | 第19-20页 |
| 2.3 P. putida类脂A的提取及结构鉴定 | 第20-21页 |
| 2.3.1 P. putida类脂A的提取 | 第20页 |
| 2.3.2 P. putida的TLC分析 | 第20页 |
| 2.3.3 P. putida类脂A的ESI/MS分析 | 第20-21页 |
| 2.4 P. putida菌株生长特性的分析 | 第21页 |
| 2.4.1 P. putida菌株在不同pH条件下的生长 | 第21页 |
| 2.4.2 P. putida菌株在不同温度条件下的生长 | 第21页 |
| 2.4.3 P. putida菌株的点种实验 | 第21页 |
| 2.5 P. putida菌株外膜特性的分析 | 第21-23页 |
| 2.5.1 细胞外膜渗透性的测定 | 第21-22页 |
| 2.5.2 几种抗生素对P. putida菌株的最小抑菌浓度的测定 | 第22页 |
| 2.5.3 菌株自凝集的测定 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-46页 |
| 3.1 P. putida KT2442编码类脂A次级脂肪酸链转移酶基因的发现 | 第23-24页 |
| 3.1.1 P. putida KT2442次级脂肪酸链转移酶与相关蛋白序列的比对 | 第23-24页 |
| 3.2 P. putida KT2442的PP0063和PP1735功能的确定 | 第24-29页 |
| 3.2.1 P. putida敲除突变株的构建及类脂A结构的鉴定 | 第24-26页 |
| 3.2.2 P. putida KT2442中回补表达菌株的构建及类脂A结构的鉴定 | 第26-29页 |
| 3.3 P. putida KT2442类脂A上PP0063和PP1735作用位置的确定 | 第29-34页 |
| 3.3.1 P. putida KT2442中异源表达菌株的构建 | 第29-31页 |
| 3.3.2 次级脂肪酸链转移酶PP0063作用位置的确定 | 第31-32页 |
| 3.3.3 次级脂肪酸链转移酶PP1735作用位置的确定 | 第32-34页 |
| 3.4 P. putida KT2442及突变菌株生长耐受特性的比较 | 第34-42页 |
| 3.4.1 P. putida KT2442及突变菌株不同pH条件的生长特性 | 第34-36页 |
| 3.4.2 酸性条件下P. putida KT2442及突变菌株类脂A结构的分析 | 第36-38页 |
| 3.4.3 P. putida KT2442及突变菌株不同温度条件的生长特性 | 第38-39页 |
| 3.4.4 低温条件下P. putida KT2442及突变菌株类脂A结构的分析 | 第39-40页 |
| 3.4.5 RT-PCR分析eptA和pagL与P. putida耐受性的关系 | 第40-42页 |
| 3.5 P. putida KT2442及突变菌株外膜特性的比较 | 第42-44页 |
| 3.5.1 P. putida KT2442及突变菌株外膜渗透性的变化 | 第42-43页 |
| 3.5.2 P. putida KT2442及突变菌株对阳离子抗菌肽及其他抗生素的抗性 | 第43-44页 |
| 3.5.3 P. putida KT2442及突变菌株自凝集能力的分析 | 第44页 |
| 3.6 P. putida KT2442类脂A合成途径的预测 | 第44-46页 |
| 主要结论与展望 | 第46-48页 |
| 主要结论 | 第46-47页 |
| 展望 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
