| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 类胡萝卜素概述 | 第9-10页 |
| 1.1.1 β-胡萝卜素理化性质 | 第9页 |
| 1.1.2 番茄红素理化性质 | 第9-10页 |
| 1.2 类胡萝卜素的合成方法 | 第10-11页 |
| 1.2.1 天然提取法 | 第10页 |
| 1.2.2 化学合成法 | 第10页 |
| 1.2.3 微生物发酵法 | 第10-11页 |
| 1.3 三孢布拉霉生物合成类胡萝卜素 | 第11-13页 |
| 1.3.1 三孢布拉霉概述 | 第11页 |
| 1.3.2 三孢布拉霉中类胡萝卜素合成途径 | 第11-12页 |
| 1.3.3 三孢布拉霉中类胡萝卜素结构基因的研究 | 第12-13页 |
| 1.3.4 三孢布拉霉合成类胡萝卜素的代谢调控 | 第13页 |
| 1.4 crgA及其调控类胡萝卜素合成研究进展 | 第13-15页 |
| 1.4.1 crgA及其表达产物 | 第13-14页 |
| 1.4.2 crgA与类胡萝卜素合成相关基因的相互作用 | 第14页 |
| 1.4.3 crgA的调控作用机制 | 第14-15页 |
| 1.5 代谢组学 | 第15-17页 |
| 1.5.1 代谢组学简介 | 第15-16页 |
| 1.5.2 微生物代谢组学分析方法 | 第16-17页 |
| 1.6 研究意义及主要内容 | 第17-18页 |
| 1.6.1 本论文的研究意义 | 第17页 |
| 1.6.2 本论文的主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第19页 |
| 2.1.4 培养基及主要溶液 | 第19-20页 |
| 2.2 菌体培养 | 第20页 |
| 2.3 crgA基因的克隆及敲除 | 第20-21页 |
| 2.3.1 crgA基因的克隆 | 第20页 |
| 2.3.2 基因敲除载体的合成 | 第20-21页 |
| 2.3.3 潮霉素对三孢布拉霉最小抑制浓度的确定 | 第21页 |
| 2.3.4 三孢布拉霉原生质体制备及转化 | 第21页 |
| 2.4 crgA基因回补菌株的构建 | 第21页 |
| 2.5 产孢能力分析 | 第21页 |
| 2.6 类胡萝卜素结构基因转录水平分析 | 第21-23页 |
| 2.6.1 总RNA的提取和反转录 | 第21-22页 |
| 2.6.2 荧光定量PCR及转录水平分析 | 第22-23页 |
| 2.7 关键酶及抗氧化酶比酶活测定 | 第23-25页 |
| 2.7.1 粗酶液的提取 | 第23页 |
| 2.7.2 蛋白质含量标准曲线的绘制 | 第23页 |
| 2.7.3 HMG-CoA还原酶酶活测定 | 第23-24页 |
| 2.7.4 超氧化物歧化酶（SOD）酶活测定 | 第24-25页 |
| 2.7.5 过氧化物酶（CAT）酶活测定 | 第25页 |
| 2.7.6 过氧化氢酶（POD）酶活测定 | 第25页 |
| 2.8 类胡萝卜素含量检测 | 第25-26页 |
| 2.8.1 标准曲线的绘制 | 第25-26页 |
| 2.8.2 生物量和类胡萝卜素的测定 | 第26页 |
| 2.9 代谢组学分析 | 第26-27页 |
| 2.9.1 代谢淬灭与代谢物提取 | 第26页 |
| 2.9.2 代谢物预处理 | 第26-27页 |
| 2.9.3 GC-MS分析 | 第27页 |
| 2.9.4 数据分析 | 第27页 |
| 2.10 代谢调控 | 第27-28页 |
| 2.10.1 肌醇对三孢布拉霉合成类胡萝卜素的影响 | 第27页 |
| 2.10.2 光照在类胡萝卜素合成过程中的作用研究 | 第27页 |
| 2.10.3 乙酸钠对三孢布拉霉合成类胡萝卜素的影响 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-46页 |
| 3.1 crgA基因克隆及分析 | 第28页 |
| 3.2 crgA基因敲除 | 第28-30页 |
| 3.2.1 潮霉素对三孢布拉霉最小抑制浓度的确定 | 第28页 |
| 3.2.2 原生质体制备 | 第28-29页 |
| 3.2.3 crgA基因的敲除与验证 | 第29-30页 |
| 3.3 crgA对三孢布拉霉产孢能力的影响 | 第30-31页 |
| 3.4 crgA对三孢布拉霉中类胡萝卜素结构基因转录水平的影响 | 第31-32页 |
| 3.5 crgA对三孢布拉霉关键酶活的影响 | 第32-34页 |
| 3.5.1 crgA对HMG-CoA还原酶的影响 | 第32-33页 |
| 3.5.2 crgA对抗氧化酶的影响 | 第33-34页 |
| 3.6 crgA对三孢布拉霉生物量和类胡萝卜素合成的影响 | 第34-35页 |
| 3.7 crgA对三孢布拉霉产物合成的影响 | 第35-43页 |
| 3.7.1 代谢谱图分析 | 第35-37页 |
| 3.7.2 差异代谢物分析 | 第37-41页 |
| 3.7.3 样品聚类分析 | 第41页 |
| 3.7.4 crgA对代谢的影响 | 第41-42页 |
| 3.7.5 潜在生物标记物的筛选 | 第42-43页 |
| 3.8 基于 ΔcrgA菌的类胡萝卜素合成人工代谢调控 | 第43-46页 |
| 3.8.1 肌醇对三孢布拉霉合成类胡萝卜素的影响 | 第43-44页 |
| 3.8.2 光照对三孢布拉霉产孢和合成类胡萝卜素的影响 | 第44-45页 |
| 3.8.3 乙酸钠对三孢布拉霉合成类胡萝卜素的影响 | 第45-46页 |
| 主要结论与展望 | 第46-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
