| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 茯苓的药用价值 | 第11-12页 |
| 1.2 茯苓的栽培现状 | 第12页 |
| 1.3 真菌遗传转化 | 第12-15页 |
| 1.4 MAPK蛋白家族的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5 基于新一代高通量测序技术的转录组测序 | 第16-17页 |
| 1.6 RNA干扰技术 | 第17-18页 |
| 1.7 实时荧光定量PCR技术 | 第18-19页 |
| 1.8 立题依据和意义 | 第19-21页 |
| 2 PEG介导的茯苓原生质体转化条件的优化 | 第21-48页 |
| 2.1 实验材料与仪器 | 第21-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.3 培养基 | 第22页 |
| 2.1.4 试剂 | 第22-24页 |
| 2.1.5 酶制剂 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 菌丝形态的研究 | 第24页 |
| 2.2.2 固体生长曲线的测定 | 第24页 |
| 2.2.3 液体生长曲线的测定 | 第24-25页 |
| 2.2.4 菌龄对原生质体制备的影响 | 第25页 |
| 2.2.5 茯苓原生质体的制备 | 第25页 |
| 2.2.6 茯苓原生质体计数 | 第25页 |
| 2.2.7 茯苓原生质体的再生 | 第25-26页 |
| 2.2.8 原生质体产量和再生率的计算 | 第26页 |
| 2.2.9 原生质体的转化 | 第26页 |
| 2.2.10 转化子PCR检测 | 第26-28页 |
| 2.2.11 转化效率的计算 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-45页 |
| 2.3.1 菌丝形态 | 第28页 |
| 2.3.2 固体生长曲线 | 第28-29页 |
| 2.3.3 液体生长曲线 | 第29-30页 |
| 2.3.4 菌龄对原生质体产量的影响 | 第30-32页 |
| 2.3.5 酶种类及浓度对原生质体产量和再生率的影响 | 第32-33页 |
| 2.3.6 酶解时间对原生质体产量和再生率的影响 | 第33-35页 |
| 2.3.7 酶解温度对原生质体产量和再生率的影响 | 第35-37页 |
| 2.3.8 酶液pH对原生质体产量和再生率的影响 | 第37-38页 |
| 2.3.9 酶解形式对原生质体产量的影响 | 第38页 |
| 2.3.10 再生培养基的成分对原生质体再生率的影响 | 第38-39页 |
| 2.3.11 原生质体涂布方法对原生质体再生率的影响 | 第39页 |
| 2.3.12 摇菌时间对PEG介导的原生质体转化的影响 | 第39-40页 |
| 2.3.13 原生质体浓度对PEG介导的原生质体转化的影响 | 第40-41页 |
| 2.3.14 外源载体浓度对PEG介导的原生质体转化的影响 | 第41页 |
| 2.3.15 转化介质Ca2+浓度对PEG介导的原生质体转化的影响 | 第41-42页 |
| 2.3.16 PEG种类对PEG介导的原生质体转化的影响 | 第42-43页 |
| 2.3.17 PEG浓度对PEG介导的原生质体转化的影响 | 第43-44页 |
| 2.3.18 转化子检测 | 第44-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-48页 |
| 3 茯苓Smk基因的研究 | 第48-69页 |
| 3.1 实验材料与仪器 | 第48-49页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第48页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第48-49页 |
| 3.2 实验方法 | 第49-59页 |
| 3.2.1 菌丝培养 | 第49页 |
| 3.2.2 茯苓RNA提取以及检测 | 第49页 |
| 3.2.3 cDNA的获得 | 第49-50页 |
| 3.2.4 茯苓MAPK相关基因的筛选 | 第50页 |
| 3.2.5 Smk沉默设计 | 第50-51页 |
| 3.2.6 引物设计 | 第51-52页 |
| 3.2.7 Smk上游片段与下游片段的克隆 | 第52-55页 |
| 3.2.8 Smk基因沉默载体的构建 | 第55-56页 |
| 3.2.9 Smk基因沉默转化子的转化 | 第56-57页 |
| 3.2.10 荧光定量方法的建立 | 第57-58页 |
| 3.2.11 Smk基因沉默转化子的荧光定量 | 第58-59页 |
| 3.2.12 Smk基因沉默转化子生长特性研究 | 第59页 |
| 3.3 结果与分析 | 第59-67页 |
| 3.3.1 RNA质量和浓度 | 第59-60页 |
| 3.3.2 茯苓Smk基因 | 第60-61页 |
| 3.3.3 Smk-up与Smk-down片段 | 第61-62页 |
| 3.3.4 Smk基因沉默载体构建 | 第62-63页 |
| 3.3.5 荧光定量方法的建立 | 第63-65页 |
| 3.3.6 Smk基因沉默转化子的表达量 | 第65-66页 |
| 3.3.7 Smk基因沉默转化子生长特性 | 第66-67页 |
| 3.4 讨论 | 第67-69页 |
| 4 结论与创新点 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第81页 |
