| 中文摘要 | 第1-16页 |
| ABSTRACT | 第16-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-33页 |
| 1 地皮菜概况 | 第20页 |
| 2 地皮菜营养成分和药用价值 | 第20-23页 |
| ·地皮菜的营养成分 | 第20-21页 |
| ·地皮菜的药用价值 | 第21-23页 |
| 3 天然产物抗肿瘤作用机制的研究 | 第23-32页 |
| ·诱导细胞周期阻滞 | 第24-26页 |
| ·诱导细胞凋亡 | 第26-28页 |
| ·诱导肿瘤细胞发生自噬及抑制肿瘤细胞的迁移 | 第28-32页 |
| 4 本课题的研究意义及研究内容 | 第32-33页 |
| 第二章 地皮菜水应激蛋白的纯化及其抗结肠癌活性的研究 | 第33-44页 |
| 1 引言 | 第33页 |
| 2 材料及方法 | 第33-38页 |
| ·实验材料及细胞株 | 第33页 |
| ·仪器及试剂 | 第33-35页 |
| ·地皮菜抗结肠癌活性蛋白的分离纯化 | 第35-38页 |
| ·地皮菜具抗结肠癌活性蛋白的MALDI-TOF/TOF质谱鉴定 | 第38页 |
| ·数据统计及处理 | 第38页 |
| 3 结果 | 第38-42页 |
| ·地皮菜抗结肠癌活性蛋白对人结肠癌细胞DLD1增殖的影响 | 第38-39页 |
| ·地皮菜中目的蛋白的分离纯化及质谱鉴定 | 第39-41页 |
| ·地皮菜抗结肠癌活性蛋白的热稳定性 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 5 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 地皮菜水应激蛋白诱导结肠癌细胞凋亡的分子机制 | 第44-59页 |
| 1 引言 | 第44页 |
| 2 材料与方法 | 第44-49页 |
| ·细胞株 | 第44页 |
| ·实验仪器及试剂 | 第44-45页 |
| ·细胞培养 | 第45页 |
| ·MTT法检测WSP1对结肠癌细胞增殖的影响 | 第45-46页 |
| ·克隆增殖实验检测WSP1对DLD1细胞增殖的影响 | 第46页 |
| ·DAPI染色法观察WSP1对细胞凋亡的影响 | 第46-47页 |
| ·流式细胞仪检测WSP1对DLD1细胞周期的影响 | 第47页 |
| ·流式细胞仪检测WSP1对细胞线粒体膜电位变化的影响 | 第47页 |
| ·Annexin V/PI双染法检测WSP1对细胞凋亡的影响 | 第47-48页 |
| ·Western blotting检测细胞周期、线粒体膜电位及凋亡相关蛋白的变化 | 第48-49页 |
| ·数据处理及分析 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-57页 |
| ·WSP1对结肠癌细胞增殖的影响 | 第49-50页 |
| ·WSP1对DLD1细胞克隆形成的影响 | 第50-51页 |
| ·WSP1对结肠癌DLD1细胞周期的影响 | 第51-52页 |
| ·DAPI染色法检测WSP1对结肠癌细胞凋亡的影响 | 第52-53页 |
| ·Annexin V/碘化丙啶双染法检测WSP1对结肠癌细胞凋亡的影响 | 第53页 |
| ·WSP1处理对DLD1细胞周期蛋白的影响 | 第53-54页 |
| ·WSP1对DLD1细胞线粒体膜电位的影响 | 第54-55页 |
| ·WSP1对半胱氨酸蛋白酶家族蛋白表达量的影响 | 第55-56页 |
| ·WSP1抗结肠癌效应的作用机制 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-58页 |
| 5 小结 | 第58-59页 |
| 第四章 WSP1通过诱导DLD1细胞的自噬抑制了其迁移 | 第59-74页 |
| 1 引言 | 第59-60页 |
| 2 材料与方法 | 第60-64页 |
| ·细胞株 | 第60页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第60页 |
| ·细胞培养 | 第60页 |
| ·细胞划痕法检测WSP1对DLD1细胞迁移的影响 | 第60-61页 |
| ·WSP1对细胞与细胞间粘附的影响 | 第61页 |
| ·免疫荧光染色及western blotting检测WSP1诱导DLD1细胞自噬的发生 | 第61-62页 |
| ·Real time PCR检测WSP1对DLDl细胞迁移相关信号分子的影响 | 第62-63页 |
| ·Western blotting检测WSP1对细胞迁移相关信号分子的影响 | 第63页 |
| ·数据统计与处理 | 第63-64页 |
| 3 结果 | 第64-72页 |
| ·WSP1处理抑制了结肠癌细胞的迁移 | 第64-65页 |
| ·WSP1诱导了结肠癌DLD1细胞-细胞的粘附能力 | 第65页 |
| ·WSP1通过p-catenin介导的EMT抑制DLD1细胞的迁移 | 第65-66页 |
| ·WSP1通过PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导DLD1细胞发生自噬 | 第66-69页 |
| ·WSP1通过诱导DLD1细胞自噬而抑制细胞迁移 | 第69-71页 |
| ·WSP1抑制结肠癌细胞抗迁移效应的分子路径 | 第71-72页 |
| 4 讨论 | 第72页 |
| 5 小结 | 第72-74页 |
| 第五章 地皮菜水应激蛋白基因的克隆表达及其对结肠癌细胞增殖的抑制作用 | 第74-84页 |
| 1 引言 | 第74页 |
| 2 材料和方法 | 第74-78页 |
| ·实验材料 | 第74-75页 |
| ·实验方法 | 第75-78页 |
| 3 结果及分析 | 第78-83页 |
| ·Re-WSP1基因的克隆与鉴定 | 第78-80页 |
| ·Re-WSP1的表达、纯化 | 第80-81页 |
| ·Re-WSP1对结肠癌SW480细胞生长的影响 | 第81页 |
| ·Re-WSP1诱导SW480细胞凋亡 | 第81-83页 |
| 4 讨论 | 第83页 |
| 5 小结 | 第83-84页 |
| 第六章 地皮菜水应激蛋白在裸鼠体内的抗结肠癌效应研究 | 第84-92页 |
| 1 引言 | 第84页 |
| 2 材料与方法 | 第84-86页 |
| ·实验动物 | 第84页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第84-85页 |
| ·主要仪器 | 第84页 |
| ·抗体及试剂 | 第84-85页 |
| ·细胞培养 | 第85页 |
| ·裸鼠结肠癌细胞皮下成瘤模型的建立 | 第85页 |
| ·模型分组及给药 | 第85页 |
| ·免疫组织化学染色 | 第85-86页 |
| ·统计学处理 | 第86页 |
| 3 实验结果 | 第86-90页 |
| ·WSP1处理对裸鼠体重的影响 | 第86-87页 |
| ·WSP1处理对裸鼠皮下肿瘤体积的影响 | 第87-88页 |
| ·免疫组化染色检测WSP1对肿瘤组织增殖、凋亡相关蛋白表达的影响 | 第88-89页 |
| ·免疫组化染色检测WSP1对肿瘤细胞迁移标志物的影响 | 第89-90页 |
| 4 讨论 | 第90-91页 |
| 5 小结 | 第91-92页 |
| 总结与展望 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-114页 |
| 附录 | 第114-115页 |
| 个人简历及攻读学位期间取得的研究成果 | 第115-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 承诺书 | 第119-120页 |
