| 中文摘要 | 第1-15页 |
| ABSTRACT | 第15-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-30页 |
| ·早发性无义突变的研究进展 | 第19-23页 |
| ·早发性无义突变 | 第19-20页 |
| ·早发性无义突变与NMD | 第20-22页 |
| ·早发性无义突变与通读 | 第22-23页 |
| ·早发性无义突变与相关疾病 | 第23-25页 |
| ·早发性无义突变与遗传性疾病 | 第23-24页 |
| ·早发性无义突变与癌症 | 第24-25页 |
| ·抗早发性无义突变药物研究进展 | 第25-29页 |
| ·氨基糖苷类药物与PTC的通读 | 第26-27页 |
| ·非氨基糖苷类药物与PTC的通读 | 第27-29页 |
| ·本课题的研究意义 | 第29-30页 |
| 第二章 早发性无义突变双荧光筛选体系的构建 | 第30-47页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·细胞、菌株与质粒 | 第30页 |
| ·酶、试剂与仪器 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-37页 |
| ·双荧光哺乳动物细胞表达载体pDsRed-EGFPmtag-的构建 | 第31-33页 |
| ·pDsRed-EGFPmtag-早发性无义突变体的构建 | 第33-34页 |
| ·细胞转染级质粒的制备 | 第34-35页 |
| ·细胞培养 | 第35页 |
| ·细胞转染 | 第35页 |
| ·细胞转染后的药物处理 | 第35页 |
| ·细胞的封片处理 | 第35页 |
| ·实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析 | 第35-37页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第37页 |
| ·实验结果 | 第37-42页 |
| ·双荧光哺乳动物细胞表达载体pDsRed-EGFPmtag-的构建 | 第37页 |
| ·pDsRed-EGFPmtag-早发性无义突变体的构建 | 第37-38页 |
| ·pDsRed-EGFPmtag-及其早发性无义突变体的真核表达 | 第38页 |
| ·双荧光哺乳动物细胞表达体系的流式细胞术分析 | 第38-40页 |
| ·双荧光哺乳动物细胞表达体系的qRT-PCR分析 | 第40-41页 |
| ·双荧光哺乳动物细胞表达体系不同PTC位点的qRT-PCR分析 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-47页 |
| 第三章 无义突变促通读药物双荧光筛选体系在F9基因中的应用 | 第47-59页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·细胞、菌株与质粒 | 第47页 |
| ·酶、试剂与仪器 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-51页 |
| ·双荧光哺乳动物细胞表达载体pDsRed-F9-EGFPmtag-的构建 | 第48-49页 |
| ·表达载体pDsRed-F9-EGFPmtag-早发性无义突变体的构建 | 第49-50页 |
| ·细胞转染级质粒的制备 | 第50页 |
| ·细胞培养 | 第50-51页 |
| ·细胞转染 | 第51页 |
| ·细胞转染后的药物处理 | 第51页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第51页 |
| ·实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析 | 第51页 |
| ·促凝血活性检测 | 第51页 |
| ·实验结果 | 第51-56页 |
| ·整合F9 cds序列的双荧光哺乳动物细胞表达载体pDsRed-F9-EGFPmtag-的构建 | 第51-52页 |
| ·pDsRed-F9-EGFPmtag-早发性无义突变体的构建 | 第52页 |
| ·pDsRed-F9-EGFPmtag-的真核表达 | 第52-53页 |
| ·整合F9 cds序列的双荧光表达体系的流式细胞术分析 | 第53页 |
| ·整合F9 cds序列的双荧光表达体系的qRT-PCR分析 | 第53-55页 |
| ·整合F9 cds序列的双荧光表达体系的促凝血活性检测 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-59页 |
| 第四章 无义突变促通读药物对抑癌基因MENl的功能恢复 | 第59-70页 |
| ·实验材料 | 第59-60页 |
| ·细胞、菌株与质粒 | 第59页 |
| ·酶、试剂与仪器 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-62页 |
| ·MEN1小基因及其早发性无义突变体的构建 | 第60页 |
| ·MEN1小基因与NMD抑制 | 第60页 |
| ·HeLa细胞培养 | 第60页 |
| ·细胞转染级质粒的制备 | 第60-61页 |
| ·HeLa细胞转染 | 第61-62页 |
| ·细胞转染后的药物处理 | 第62页 |
| ·Western Blotting分析 | 第62页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第62页 |
| ·实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析 | 第62页 |
| ·实验结果 | 第62-66页 |
| ·MEN1小基因及其早发性无义突变体的构建 | 第62-63页 |
| ·MEN1小基因受NMD途径调控 | 第63页 |
| ·促通读药物对MEN1小基因的作用 | 第63-64页 |
| ·敲减MEN1对HeLa细胞凋亡的抑制 | 第64-65页 |
| ·敲减MEN1对Caspase 8基因的影响 | 第65-66页 |
| ·促通读药物处理M3突变体上调Caspase 8基因 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-70页 |
| 第五章 无义突变促通读药物双荧光筛选体系的扩展应用 | 第70-87页 |
| ·实验材料 | 第72-73页 |
| ·细胞、菌株与质粒 | 第72页 |
| ·酶、试剂与仪器 | 第72-73页 |
| ·实验方法 | 第73-78页 |
| ·凝血因子Ⅸ小基因Ⅱ(Mini-hF9-Ⅱ gene)的构建 | 第73-74页 |
| ·Mini-hF9-Ⅱ基因无义突变体的构建 | 第74-75页 |
| ·Mini-hF9-Ⅱ基因表达载体的哺乳动物细胞转染 | 第75-76页 |
| ·表达载体pCMV-tag-3B-Mini-hF9-Ⅱ转染后的RT-PCR检测 | 第76页 |
| ·表达载体pCMV-tag-3B-Mini-hF9-Ⅱ转染后的Western Blotting检测 | 第76页 |
| ·间充质干细胞从髓核组织中的分离及培养 | 第76-77页 |
| ·培养细胞的流式细胞术分析 | 第77页 |
| ·培养细胞的成脂、成骨和成软骨多向分化能力分析 | 第77页 |
| ·实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析 | 第77页 |
| ·双荧光载体pDsRed-EGFPmtag-转染间充质干细胞 | 第77-78页 |
| ·实验结果 | 第78-85页 |
| ·凝血因子Ⅸ小基因Ⅱ(Mini-hF9-Ⅱ gene)的构建 | 第78-80页 |
| ·Mini-hF9-Ⅱ基因无义突变体的构建 | 第80-81页 |
| ·表达载体pCMV-tag-3B-Mini-hF9-Ⅱ转染后的RT-PCR检测 | 第81-82页 |
| ·表达载体pCMV-tag-3B-Mini-hF9-Ⅱ转染后的Western Blotting检测 | 第82页 |
| ·间充质干细胞的细胞形态学鉴定 | 第82-83页 |
| ·间充质干细胞免疫表型的流式细胞术鉴定 | 第83页 |
| ·间充质干细胞成脂、成骨和成软骨多向分化能力鉴定 | 第83-84页 |
| ·间充质干细胞细胞外基质qRT-PCR鉴定 | 第84页 |
| ·双荧光载体pDsRed-EGFPmtag-转染间充质干细胞 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-87页 |
| 总结与展望 | 第87-90页 |
| 参考文献 | 第90-105页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 个人简况及联系方式 | 第107-108页 |
| 承诺书 | 第108-109页 |
