| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| ·有机溶剂对微生物细胞的毒害作用及耐受机制 | 第8-9页 |
| ·有机溶剂对细胞的毒害性 | 第8页 |
| ·有机溶剂耐受性机制 | 第8-9页 |
| ·全局转录调控机制工程简介 | 第9-11页 |
| ·全局转录机制工程的引入 | 第9-10页 |
| ·全局转录调控机制工程的研究进展 | 第10-11页 |
| ·蛋白组学简介 | 第11-12页 |
| ·Red同源重组的介绍 | 第12页 |
| ·本论文研究意义和主要研究内容 | 第12-14页 |
| ·本课题的来源 | 第12-13页 |
| ·本课题的研究意义 | 第13页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第14-26页 |
| ·实验材料 | 第14-16页 |
| ·实验菌种与载体 | 第14页 |
| ·实验所用引物 | 第14-15页 |
| ·实验仪器和试剂 | 第15-16页 |
| ·主要培养基及溶液 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-26页 |
| ·Sigma 70（σ70）随机突变库的构建 | 第16-17页 |
| ·基因突变库的高通量筛选 | 第17-18页 |
| ·菌体总蛋白的制备及双向电泳 | 第18-19页 |
| ·基因敲除及基因插入基因组 | 第19-23页 |
| ·重组菌株构建的方法 | 第23-24页 |
| ·重组菌株的蛋白表达 | 第24页 |
| ·基因敲除菌株及其回补菌株的有机溶剂耐受性验证 | 第24-25页 |
| ·ATP 浓度检测 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-50页 |
| ·σ70基因突变库的构建及耐溶剂突变株的筛选 | 第26-35页 |
| ·σ70基因突变库的构建 | 第26页 |
| ·环己烷耐受菌株的筛选 | 第26-30页 |
| ·丁醇耐受菌株的筛选 | 第30-34页 |
| ·耐受性菌株σ~(70)结构分析 | 第34-35页 |
| ·有机溶剂对C9细胞形态的影响 | 第35-36页 |
| ·有机溶剂对C9胞内ATP的影响 | 第36页 |
| ·耐受菌株C9蛋白组学分析 | 第36-37页 |
| ·有机溶剂耐受性基因的敲除及克隆表达 | 第37-44页 |
| ·有机溶剂耐受性基因的敲除 | 第37-39页 |
| ·抗性片段的消除 | 第39-40页 |
| ·敲除基因的回补 | 第40-42页 |
| ·重组菌株有机溶剂耐受性验证 | 第42-44页 |
| ·异源mmsB基因插入大肠杆菌基因组 | 第44-50页 |
| ·FRT-T7-mmsB-Tet 基因片段的克隆表达 | 第44-46页 |
| ·FRT-kan-T7-mmsB 插入 E. coli JM109(DE3)基因组 | 第46-47页 |
| ·E. coli JM109(DE3) (ΔendA::mmsB)有机溶剂耐受性验证 | 第47-48页 |
| ·基因插入型菌株在全细胞转化中的应用 | 第48-50页 |
| 主要结论与展望 | 第50-52页 |
| 主要结论 | 第50-51页 |
| 展望 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录A: 本实验所涉及的相关基因 | 第58-60页 |
| 附录B：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第60页 |
