| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-17页 |
| 图表清单 | 第17-19页 |
| 英文缩略词中英文注释表 | 第19-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-38页 |
| ·概述 | 第21页 |
| ·miRNA | 第21-29页 |
| ·miRNA生物合成及作用方式 | 第21-22页 |
| ·miRNA与肿瘤 | 第22-29页 |
| ·miRNA与胃癌 | 第29-32页 |
| ·miRNA与胃癌的发生、发展 | 第29-31页 |
| ·miRNA与胃癌诊断 | 第31页 |
| ·miRNA与胃癌预后 | 第31-32页 |
| ·miR-17～92簇与胃癌 | 第32-33页 |
| ·本论文研究目的、方法、技术路线、预期结果及意义 | 第33-38页 |
| ·研究目的 | 第33-34页 |
| ·研究方法 | 第34页 |
| ·技术路线 | 第34-37页 |
| ·预期结果及意义 | 第37-38页 |
| 第二章 miR-17-5p/20a在胃癌组织中的表达及临床意义 | 第38-49页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·病例来源及组织标本采集 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-43页 |
| ·组织标本的处理及保存 | 第39页 |
| ·组织标本RNA提取及逆转录 | 第39-40页 |
| ·PCR扩增 | 第40页 |
| ·标准质粒构建 | 第40-42页 |
| ·定量PCR | 第42页 |
| ·统计学分析 | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43-46页 |
| ·组织标本总RNA完整性及纯度检测 | 第43页 |
| ·RT-PCR检测胃癌组织及配对的癌旁组织中内参U6、miR-17-5p及miR-20a表达 | 第43-44页 |
| ·定量PCR检测miR-17-5p、miR-20a和U6标准质粒 | 第44页 |
| ·miR-17-5p/20a在胃癌组织和癌旁组织的表达 | 第44-45页 |
| ·miR-17-5p/20a的表达与临床病理参数间的相关性 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第三章 miR-17-5p/20a在胃癌细胞中的功能分析 | 第49-67页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·细胞株及实验动物 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-54页 |
| ·细胞培养 | 第50页 |
| ·细胞转染 | 第50-51页 |
| ·裸鼠皮下胃癌移植瘤治疗模型建立 | 第51-52页 |
| ·石蜡切片 | 第52页 |
| ·组织标本RNA提取及逆转求 | 第52页 |
| ·定量RT-PCR | 第52页 |
| ·细胞周期检测 | 第52页 |
| ·细胞计数 | 第52-53页 |
| ·平板克隆 | 第53页 |
| ·细胞凋亡检测 | 第53页 |
| ·蛋白检测 | 第53-54页 |
| ·统计学分析 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-64页 |
| ·miR-17-5p/20a在胃癌细胞株中的表达 | 第54-55页 |
| ·过表达miR-17-5p/20a对胃癌细胞的影响 | 第55-58页 |
| ·低表达miR-17-5p/20a对胃癌细胞的影响 | 第58-61页 |
| ·antagomir-17-5p/20a对皮下胃癌移植瘤治疗作用 | 第61-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 第四章 miR-17-5p/20a调控靶基因的预测、鉴定及验证 | 第67-82页 |
| ·材料 | 第67页 |
| ·细胞株 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·主要仪器 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-74页 |
| ·软件预测miR-17-5p/20a调控的靶基因 | 第67-68页 |
| ·野生型p21及TP53INP1 mRNA 3'UTR片段克隆 | 第68-69页 |
| ·突变型p21 mRNA及TP53INPI mRNA 3’UTR片段克隆 | 第69-70页 |
| ·突变型及野生型3'UTR报告基因载体构建 | 第70-71页 |
| ·大提质粒 | 第71页 |
| ·双报告基因检测分析 | 第71-72页 |
| ·p21定量PCR检测方法建立 | 第72-73页 |
| ·TP531NP1定量PCR检测方法建立 | 第73页 |
| ·Western blot | 第73-74页 |
| ·统计学分析 | 第74页 |
| ·结果 | 第74-79页 |
| ·软件预测miR-17-5p/20a与p21和TP53INP1mRNA 3’UTR结合位点 | 第74-75页 |
| ·克隆野生型3’UTR中miR-17-5p/20a结合位点 | 第75-76页 |
| ·克隆突变型3’UTR中miR-17-5p/20a结合位点 | 第76-77页 |
| ·胃癌细胞中miR-17-5p/20a 在转录后水平靶向负调控p21和TP53INP1 | 第77-78页 |
| ·体内antagomir-17-5p/20a靶向上调p21和TP53INP1蛋白表达 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79-81页 |
| ·小结 | 第81-82页 |
| 第五章 MDM2参与协助miR-17-5p/20a调控及发挥癌基因作用 | 第82-94页 |
| ·材料 | 第82页 |
| ·细胞株 | 第82页 |
| ·主要试剂 | 第82页 |
| ·方法 | 第82-84页 |
| ·细胞培养 | 第82页 |
| ·总蛋白提取 | 第82-83页 |
| ·Western blot | 第83页 |
| ·大提质粒 | 第83页 |
| ·细胞转染 | 第83-84页 |
| ·细胞周期 | 第84页 |
| ·RNA提取及逆转录 | 第84页 |
| ·定量PCR | 第84页 |
| ·TUNEL检测细胞凋亡 | 第84页 |
| ·统计学分析 | 第84页 |
| ·结果 | 第84-91页 |
| ·组织中TP53INP1蛋白表达水平与miR-17-5p/20a成负相关,部分组织中 #21的蛋白表达与miR-17-5p/20a成负相关 | 第84-85页 |
| ·组织中MDM2与p21蛋白表达成负相关 | 第85-86页 |
| ·MDM2在miRNAs mimic和inhibitor转染细胞中的表达情况 | 第86-87页 |
| ·抑制MDM2的表达对miR-17-5p/20a调控p21的影响 | 第87-88页 |
| ·抑制MDM2的表达对miR-17-5p/20a功能的影响 | 第88-89页 |
| ·恢复MDM2的表达对miR-17-5p调控p21和功能的影响 | 第89-91页 |
| ·讨论 | 第91-93页 |
| ·小结 | 第93-94页 |
| 第六章 循环miR-17-5p/20a在胃癌的临床诊断应用 | 第94-105页 |
| ·材料 | 第94页 |
| ·病例来源及血浆标本采集 | 第94页 |
| ·细胞株及实验动物 | 第94页 |
| ·主要试剂 | 第94页 |
| ·主要仪器 | 第94页 |
| ·方法 | 第94-96页 |
| ·血浆标本的处理与保存 | 第95页 |
| ·血浆总RNA提取 | 第95页 |
| ·逆转录 | 第95页 |
| ·定量RT-PCR | 第95页 |
| ·裸鼠皮下移植瘤治疗模型建立 | 第95页 |
| ·裸鼠血标本的收集、处理与保存 | 第95-96页 |
| ·统计学分析 | 第96页 |
| ·结果 | 第96-101页 |
| ·定量PCR检测miR-17-5p、miR-20a和U6标准质粒 | 第96-97页 |
| ·胃癌患者术前血浆与健康者血浆中miR-17-5p/20a表达比较 | 第97页 |
| ·胃癌患者术前血浆中miR-17-5p/20a的表达与临床病理参数的相关性 | 第97-98页 |
| ·配对的术前与术后血浆中miR-17-5p/20a表达比较 | 第98页 |
| ·胃癌患者术前、术后及复发患者血浆中miR-17-5p/20a表达比较 | 第98-99页 |
| ·胃癌患者术前血浆miR-17-5p/20a表达水平与患者生存率相关 | 第99-100页 |
| ·胃癌患者术前血浆miR-17-5p/20a表达水平与患者预后预测 | 第100页 |
| ·裸鼠皮下移植瘤治疗前后循环miR-17-5p/20a的表达 | 第100-101页 |
| ·讨论 | 第101-104页 |
| ·小结 | 第104-105页 |
| 第七章 结论与展望 | 第105-107页 |
| ·结论 | 第105页 |
| ·展望 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 在学期间发表的学术论文及其他科研成果 | 第119-121页 |
