| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·氨基酸及其衍生物简介 | 第10页 |
| ·非天然氨基酸及其衍生物研究的重要意义 | 第10-11页 |
| ·非天然氨基酸及其衍生物在农业中的应用 | 第10-11页 |
| ·非天然氨基酸及其衍生物在医药研究中的重要应用 | 第11页 |
| ·L-叔亮氨酸(L-Tle)及其衍生物的应用 | 第11-12页 |
| ·L-叔亮氨酸的制备方法 | 第12-16页 |
| ·拆分消旋叔亮氨酸制备光学纯叔亮氨酸 | 第12-14页 |
| ·不对称合成光学纯叔亮氨酸 | 第14-16页 |
| ·酶促不对称合成L-叔亮氨酸 | 第16-21页 |
| ·亮氨酸脱氢酶(LeuDH)简介 | 第16页 |
| ·LeuDH氨化还原TMP生成L-Tle的催化机理 | 第16-18页 |
| ·辅酶循环再生 | 第18-19页 |
| ·生物催化反应工程 | 第19-21页 |
| ·本课题研究的目的及意义 | 第21页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第21-22页 |
| 第2章 亮氨酸脱氢酶的基因发掘 | 第22-35页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·材料与方法 | 第22-30页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·实验仪器 | 第23页 |
| ·菌株与质粒 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24页 |
| ·分析方法 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-33页 |
| ·亮氨酸脱氢酶(LeuDH)的基因发掘 | 第30-31页 |
| ·亮氨酸脱氢酶的克隆表达 | 第31-33页 |
| ·复筛-热稳定性比较 | 第33页 |
| ·本章小结 | 第33-35页 |
| 第3章 亮氨酸脱氢酶EsLeuDH的酶学性质研究 | 第35-45页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·材料与方法 | 第35-37页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35页 |
| ·重组大肠杆菌BL21/pET28a-EsLeuDH摇瓶培养与产酶 | 第35页 |
| ·亮氨酸脱氢酶EsLeuDH的纯化 | 第35-36页 |
| ·温度对亮氨酸脱氢酶EsLeuDH的影响 | 第36页 |
| ·亮氨酸脱氢酶EsLeuDH的热稳定性研究 | 第36页 |
| ·pH对亮氨酸脱氢酶EsLeuDH的影响 | 第36页 |
| ·金属离子及EDTA对亮氨酸脱氢酶EsLeuDH的影响 | 第36页 |
| ·EsLeuDH的动力学参数测定 | 第36-37页 |
| ·EsLeuDH的底物特异性 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-44页 |
| ·重组亮氨酸脱氢酶EsLeuDH的纯化 | 第37-38页 |
| ·温度对亮氨酸脱氢酶EsLeuDH活力的影响 | 第38页 |
| ·亮氨酸脱氢酶EsLeuDH的热稳定性研究 | 第38页 |
| ·pH对亮氨酸脱氢酶EsLeuDH活力的影响 | 第38-40页 |
| ·金属离子及EDTA对亮氨酸脱氢酶EsLeuDH活力的影响 | 第40-41页 |
| ·EsLeuDH的动力学参数测定 | 第41-42页 |
| ·EsLeuDH的底物特异性 | 第42-44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第4章 构建EsLeuDH与葡萄糖脱氢酶共表达质粒并用于催化三甲基丙酮酸制备L-叔亮氨酸的研究 | 第45-60页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·材料与方法 | 第45-51页 |
| ·主要使用仪器与试剂 | 第45页 |
| ·分析方法 | 第45-46页 |
| ·底物检测 | 第46页 |
| ·菌株与质粒载体 | 第46-47页 |
| ·引物设计 | 第47页 |
| ·共表达质粒pET28a-E-G与重组细胞的构建 | 第47-49页 |
| ·重组菌BL 21/pET28a-E-G的发酵培养及诱导条件优化 | 第49-50页 |
| ·重组冻干整细胞制备L-叔亮氨酸的催化反应 | 第50-51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-59页 |
| ·重叠PCR法构建EsLeuDH-BmGDH大片段 | 第51页 |
| ·重组菌BL 21/pET28a-E-G的诱导表达及优化 | 第51-52页 |
| ·重组菌BL 21/pET28a-E-G的发酵表达 | 第52-53页 |
| ·重组细胞氨化还原TMP制备L-叔亮氨酸 | 第53-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 结论和展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
| 硕士在读期间撰写的论文 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
