| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-39页 |
| 第一节 糖蛋白 | 第16-22页 |
| ·蛋白编译后修饰概述 | 第16页 |
| ·蛋白糖基化的类型 | 第16-19页 |
| ·N-连糖蛋白 | 第16-18页 |
| ·O-连糖蛋白 | 第18页 |
| ·S-糖苷键型 | 第18-19页 |
| ·GPI 锚定蛋白 | 第19页 |
| ·C-糖蛋白 | 第19页 |
| ·蛋白糖的功能 | 第19-20页 |
| ·蛋白糖与肿瘤 | 第20-22页 |
| 第二节 糖蛋白组学 | 第22-29页 |
| ·糖蛋白的富集纯化 | 第22-26页 |
| ·凝集素富集法 | 第23-25页 |
| ·硼酸法 | 第25页 |
| ·酰肼化学富集法 | 第25页 |
| ·β-消除米氏加成反应 | 第25-26页 |
| ·蛋白组学分析 | 第26-29页 |
| 第三节 点击化学以及其在生物研究中的应用 | 第29-35页 |
| ·点击化学概念 | 第29页 |
| ·点击化学生物研究中的应用—生物正交反应 | 第29-35页 |
| ·叠氮化物-炔环加成（Azide-Alkyne Cycloaddition） | 第29-31页 |
| ·无铜催化叠氮化物炔环加成（Copper-Free Azide-Alkyne Cycloaddition） | 第31-33页 |
| ·施陶丁格链接反应（Staudinger Ligation） | 第33页 |
| ·基于四半胱氨酸的蛋白标记（tetracysteine-based protein detection） | 第33-34页 |
| ·羰基化合物温和的缩合反应 | 第34-35页 |
| 第四节 细胞表面糖蛋白的分离技术 | 第35-38页 |
| ·细胞表面分子生物素化技术 | 第35-37页 |
| ·点击化学在糖蛋白组学中的应用 | 第37-38页 |
| 第五节 目的和意义 | 第38-39页 |
| 第二章 人乳腺癌细胞糖蛋白组学研究 | 第39-56页 |
| 第一节 材料与方法 | 第39-47页 |
| ·实验材料和仪器 | 第39-43页 |
| ·细胞株 | 第39页 |
| ·相关试剂 | 第39-40页 |
| ·培养基和主要试剂的配制方法 | 第40-42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-47页 |
| ·细胞培养及蛋白的提取 | 第43页 |
| ·使用 LCA 凝集素对糖蛋白的富集 | 第43-44页 |
| ·使用 TCA 沉淀对糖蛋白进行纯化 | 第44页 |
| ·双向电泳 | 第44-45页 |
| ·硝酸银染色 | 第45-46页 |
| ·二维电泳对比分析 | 第46页 |
| ·蛋白酶切及质谱鉴定 | 第46-47页 |
| 第二节 实验结果 | 第47-53页 |
| ·LCA 凝集素亲和富集 Hs578BST 与 Hs578T 的 N-糖基化蛋白 | 第47页 |
| ·Hs578BST 与 Hs578T 的 N-糖基化蛋白组的比较分析 | 第47-49页 |
| ·Hs578BST 与 Hs578T 中显著差异糖蛋白的鉴定及分析 | 第49-53页 |
| 第三节 讨论 | 第53-55页 |
| 本章小结 | 第55-56页 |
| 第三章 P4HA2 表达及其在乳腺癌细胞系中作用的研究 | 第56-84页 |
| 第一节 材料与方法 | 第56-70页 |
| ·实验材料和仪器 | 第56-59页 |
| ·细胞株 | 第56页 |
| ·相关试剂 | 第56-57页 |
| ·培养基和主要试剂的配制方法 | 第57-59页 |
| ·主要仪器 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-70页 |
| ·Hs578T RNA 的提取 | 第59-60页 |
| ·Realtime PCR | 第60页 |
| ·Western Blotting | 第60-61页 |
| ·P4HA2 在乳腺癌组织中的免疫组化分析 | 第61-62页 |
| ·P4HA2 基因的扩增 | 第62-63页 |
| ·P4HA2 基因片段 PCR 产物的酶切 | 第63页 |
| ·pcDNA3.1 载体质粒的制备 | 第63-64页 |
| ·pcDNA3.1 载体质粒的酶切 | 第64-65页 |
| ·P4HA2 基因片段和 pcDNA3.1 载体质粒的连接 | 第65页 |
| ·CaCl2法转化连接产物入大肠杆菌 DH5α | 第65页 |
| ·转化子的 PCR 初步鉴定 | 第65-66页 |
| ·转化子的酶切鉴定 | 第66页 |
| ·P4HA2 基因测序 | 第66页 |
| ·Hs578T-P4HA2 细胞的培养与瞬时转染 | 第66-67页 |
| ·Hs578T-P4HA2 细胞增殖计数 | 第67页 |
| ·Hs578T-P4HA2 细胞迁移能力检测 | 第67-68页 |
| ·P4HA2 在 Hs578T 细胞系中 RNA 干扰转染 | 第68-69页 |
| ·Hs578T-shP4HA2 细胞增殖计数 | 第69页 |
| ·Hs578T-shP4HA2 细胞迁移能力检测 | 第69页 |
| ·293T-P4HA2 细胞的培养与转染, 细胞增殖计数以及迁移能力的检测 | 第69-70页 |
| 第二节 实验结果 | 第70-82页 |
| ·P4HA1，P4HA2 二维电泳结果差异 | 第70页 |
| ·P4HA1，P4HA2 以及 P4HB 在细胞系中表达的检测 | 第70-71页 |
| ·P4HA2 在乳腺癌与正常乳腺组织中的表达 | 第71-72页 |
| ·pcDNA3.1-P4HA2 重组质粒的构建 | 第72-78页 |
| ·pcDNA3.1-P4HA2 及 P4HA2-shRNA 瞬时转染及对 Hs578T 细胞行为的影响 | 第78-79页 |
| ·pcDNA3.1-P4HA2 瞬时转染及对 293T 细胞行为的影响 | 第79-82页 |
| 第三节 讨论 | 第82-83页 |
| 本章小结 | 第83-84页 |
| 第四章 基于点击化学反应标记细胞表面糖蛋白技术的建立 | 第84-108页 |
| 第一节 材料与方法 | 第84-93页 |
| ·实验材料和仪器 | 第84-85页 |
| ·细胞株 | 第84页 |
| ·相关试剂 | 第84页 |
| ·培养基和主要试剂的配制方法 | 第84-85页 |
| ·主要仪器 | 第85页 |
| ·实验方法 | 第85-93页 |
| ·非天然单糖及探针的合成 | 第85-86页 |
| ·Ac4ManNAz 与 4-EN 的体外化学反应 | 第86-87页 |
| ·流式细胞仪检测分析 | 第87页 |
| ·激光共聚焦检测分析 | 第87-88页 |
| ·直链炔基探针的合成 | 第88-89页 |
| ·共聚焦检测合成探针活性 | 第89页 |
| ·DTT 对 Alykne-SS- Biotin 的还原反应 | 第89-90页 |
| ·共聚焦检测细胞表面糖蛋白的生物素化 | 第90页 |
| ·反应试剂对细胞膜功能的影响 | 第90页 |
| ·Alykne-SS-Biotin 细胞膜的穿透性研究 | 第90-91页 |
| ·Western blot 检测 Alkyne-LC-Biotin 标记的细胞总蛋白 | 第91页 |
| ·Western blot 检测 Alkyne-LC-Biotin 对细胞表面糖蛋白的分离 | 第91-92页 |
| ·Alkyne-SS-Biotin 对细胞表面糖蛋白的分离 | 第92-93页 |
| 第二节 实验结果 | 第93-106页 |
| ·Ac4ManNAz 与 4-EN 的体外化学反应 | 第93-94页 |
| ·Ac4ManNAz 与 4-EN 在细胞中的化学反应 | 第94-95页 |
| ·直链炔基探针的合成 | 第95-97页 |
| ·对直链炔基探针在细胞反应性的检测 | 第97-98页 |
| ·Alykne-SS- Biotin 的还原断裂检测 | 第98-99页 |
| ·共聚焦检测细胞表面糖蛋白的生物素化 | 第99页 |
| ·反应试剂对细胞膜功能的影响 | 第99-101页 |
| ·Alykne-SS-Biotin 细胞膜的穿透性研究 | 第101-102页 |
| ·Alkyne-LC-Biotin 对细胞膜表面糖蛋白的分离 | 第102-104页 |
| ·Alkyne-SS-Biotin 对细胞膜表面糖蛋白的分离 | 第104-106页 |
| 第三节 讨论 | 第106-107页 |
| 本章小结 | 第107-108页 |
| 第五章 癌细胞表面糖蛋白组学研究及 NrCAM 在肺腺癌细胞中的表达 | 第108-127页 |
| 第一节 材料与方法 | 第108-112页 |
| ·实验材料和仪器 | 第108-109页 |
| ·细胞株 | 第108页 |
| ·相关试剂 | 第108页 |
| ·培养基和主要试剂的配制方法 | 第108-109页 |
| ·主要仪器 | 第109页 |
| ·实验方法 | 第109-112页 |
| ·使用 Alkyne-SS-Biotin 分离癌细胞表面糖蛋白 | 第109页 |
| ·HPLC-MS/MS 分析 Alkyne-SS-Biotin 分离糖蛋白 | 第109-110页 |
| ·生物信息学分析 | 第110页 |
| ·对鉴定蛋白可靠性的考察 | 第110-111页 |
| ·免疫荧光检测 NrCAM 在 A549 细胞表面的表达 | 第111页 |
| ·免疫组化检测 NrCAM 在人非小细胞肺癌中的表达 | 第111-112页 |
| 第二节 实验结果 | 第112-124页 |
| ·HPLC-MS/MS 鸟枪法检测 | 第112页 |
| ·鉴定蛋白的生物信息学分析 | 第112-113页 |
| ·随机鉴定蛋白表达 | 第113-120页 |
| ·NrCAM 在 A549 中的鉴定以及表达 | 第120-121页 |
| ·NrCAM 的免疫组化分析 | 第121-124页 |
| 第三节 讨论 | 第124-126页 |
| 本章小结 | 第126-127页 |
| 第六章 gp96 在不同癌细胞中唾液酸修饰差异的研究 | 第127-134页 |
| 第一节 材料与方法 | 第127-130页 |
| ·实验材料和仪器 | 第127页 |
| ·相关试剂 | 第127页 |
| ·培养基和主要试剂的配制方法 | 第127页 |
| ·主要仪器 | 第127页 |
| ·实验方法 | 第127-130页 |
| ·HPLC-MS/MS 对 gp96 的鉴定 | 第127-128页 |
| ·gp96 在不同细胞中表达分析 | 第128页 |
| ·ELISA 检测 gp96 生物素化 | 第128页 |
| ·使用凝集素 WGA 检测 gp96 的唾液酸化差异 | 第128-130页 |
| 第二节 实验结果 | 第130-133页 |
| ·gp96 在不同细胞系和相应细胞表面糖蛋白组分中的表达 | 第130-131页 |
| ·ELISA 检测 gp96 生物素化及唾液酸含量 | 第131-133页 |
| 第三节 讨论 | 第133页 |
| 本章小结 | 第133-134页 |
| 总结与展望 | 第134-137页 |
| 一 总结 | 第134-136页 |
| 二 展望 | 第136-137页 |
| 创新点 | 第137-138页 |
| 参考文献 | 第138-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
| 附录 | 第145-166页 |
| 使用 HPLC-MS/MS 在鉴定蛋白信息 | 第145-166页 |
| 个人简历 | 第166页 |
| 在学期间研究成果 | 第166-168页 |
