| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-30页 |
| 第一章 引言 | 第30-48页 |
| 第一节 MicroRNAs 与肝癌 | 第30-34页 |
| 第二节 MicroRNAs 与表观遗传学调控 | 第34-35页 |
| 第三节 NF-κB 信号转导途径 | 第35-40页 |
| 第四节 乙肝病毒 X 蛋白与肝癌 | 第40-46页 |
| ·乙肝病毒X蛋白 | 第40-41页 |
| ·肝细胞肝癌 | 第41-42页 |
| ·乙肝病毒X蛋白与肝癌发生的关系 | 第42-46页 |
| 第五节 研究内容、目的和意义 | 第46-48页 |
| 第二章 miR-520e 对肝癌细胞生长的作用 | 第48-116页 |
| 第一节 实验材料 | 第49-53页 |
| ·肝癌组织样本及来源 | 第49页 |
| ·菌株 | 第49页 |
| ·细胞株 | 第49-50页 |
| ·实验动物 | 第50页 |
| ·质粒及microRNA | 第50页 |
| ·主要试剂 | 第50-52页 |
| ·实验仪器 | 第52页 |
| ·计算机软件 | 第52-53页 |
| 第二节 实验方法 | 第53-84页 |
| ·细胞培养及传代 | 第53-54页 |
| ·细胞株冻存 | 第54-55页 |
| ·冻存细胞复苏 | 第55-56页 |
| ·稳定细胞系的建立 | 第56-57页 |
| ·质粒的小量提取 | 第57-59页 |
| ·质粒的纯化和定量 | 第59页 |
| ·细胞基因组提取 | 第59-61页 |
| ·RNA提取及反转录cDNA合成 | 第61-64页 |
| ·microRNA加尾及cDNA合成 | 第64-65页 |
| ·实时定量PCR(Q-Real-time PCR) | 第65-66页 |
| ·DNA亚硫酸氢盐转化 | 第66-68页 |
| ·miR-520e前体(pre-miR-520e)表达载体构建 | 第68-73页 |
| ·miR-520e启动子及其突变体双荧光素酶报告基因载体构建 | 第73-74页 |
| ·基因转染 | 第74-77页 |
| ·MTT检测细胞生长 | 第77-78页 |
| ·流式细胞仪样品制备及检测 | 第78-79页 |
| ·平板克隆形成实验 | 第79页 |
| ·EdU荧光显微镜检测细胞增殖 | 第79-81页 |
| ·动物体内成瘤实验 | 第81-82页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测 | 第82-84页 |
| ·对照实验 | 第84页 |
| ·统计学分析 | 第84页 |
| 第三节 实验结果 | 第84-111页 |
| ·miR-520e在肝细胞系及临床肝癌组织中低表达 | 第84-87页 |
| ·DNA超甲基化是导致miR-520e下调的原因之一 | 第87-99页 |
| ·miR-520e具有抑制肝癌细胞增殖的作用 | 第99-106页 |
| ·miR-520e在动物体内具有抑制肝癌成瘤的作用 | 第106-111页 |
| 第四节 讨论 | 第111-116页 |
| 第三章 miR-520e 抑制肝癌细胞生长作用的分子机制 | 第116-160页 |
| 第一节 实验材料 | 第116-120页 |
| ·菌株 | 第116页 |
| ·细胞系 | 第116页 |
| ·质粒及microRNA | 第116页 |
| ·siRNA干扰片段 | 第116-117页 |
| ·抗体来源 | 第117页 |
| ·主要试剂 | 第117-119页 |
| ·实验仪器 | 第119页 |
| ·计算机软件 | 第119-120页 |
| 第二节 实验方法 | 第120-138页 |
| · | 第120页 |
| ·细胞的培养 | 第120页 |
| ·细胞的冻存 | 第120页 |
| ·冻存细胞的复苏 | 第120页 |
| ·质粒的提取 | 第120页 |
| ·质粒的纯化和定量 | 第120页 |
| ·DNA提取 | 第120-121页 |
| ·NIK 3′UTR 双荧光素酶报告基因载体构建 | 第121-124页 |
| ·基因转染 | 第124页 |
| ·RNA提取及反转录cDNA合成 | 第124页 |
| ·实时定量PCR（qRT-PCR） | 第124-125页 |
| ·反转录PCR（RT-PCR） | 第125-126页 |
| ·免疫印迹检测 | 第126-133页 |
| ·细胞总蛋白提取 | 第133-134页 |
| ·细胞核蛋白提取 | 第134-135页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测 | 第135页 |
| ·免疫荧光染色 | 第135-137页 |
| ·对照实验 | 第137页 |
| ·统计学分析 | 第137-138页 |
| 第三节 实验结果 | 第138-156页 |
| ·NIK是miR-520e的靶基因 | 第138-144页 |
| ·NIK参与miR-520e抑制肝癌细胞增殖 | 第144-148页 |
| ·miR-520e抑制NIK-ERK1/2-NF-κB信号转导通路 | 第148-156页 |
| 第四节 讨论 | 第156-160页 |
| 第四章 miR-520e 在 HBx 促进肝癌细胞增殖中的作用 | 第160-185页 |
| 第一节 实验材料 | 第161-165页 |
| ·菌株 | 第161页 |
| ·细胞系 | 第161-162页 |
| ·质粒及microRNAs | 第162页 |
| ·siRNA干扰片段 | 第162页 |
| ·Western Blotting 抗体 | 第162页 |
| ·主要试剂 | 第162-164页 |
| ·实验仪器 | 第164页 |
| ·计算机软件 | 第164-165页 |
| 第二节 实验方法 | 第165-172页 |
| ·细胞培养 | 第165页 |
| ·细胞株的冻存 | 第165页 |
| ·冻存细胞的复苏 | 第165页 |
| ·质粒的提取 | 第165页 |
| ·microRNA加尾及cDNA合成 | 第165-166页 |
| ·MEKK23′UTR载体构建 | 第166-168页 |
| ·基因转染 | 第168-169页 |
| ·RNA提取及cDNA合成 | 第169页 |
| ·实时定量PCR（Real-time PCR） | 第169-170页 |
| ·MTT检测细胞生长 | 第170页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测 | 第170-171页 |
| ·免疫印迹检测 | 第171页 |
| ·对照实验 | 第171页 |
| ·统计学分析 | 第171-172页 |
| 第三节 实验结果 | 第172-181页 |
| ·HBx下调miR-520e的表达水平 | 第172-175页 |
| ·miR-520e抑制HBx阳性的肝细胞和肝癌细胞的增殖 | 第175-177页 |
| ·MEKK2是miR-520e的靶基因 | 第177-180页 |
| ·MEKK2参与miR-520e抑制肝癌细胞增殖 | 第180-181页 |
| 第四节 讨论 | 第181-185页 |
| 第五章 小结 | 第185-186页 |
| 展望 | 第186-187页 |
| 参考文献 | 第187-207页 |
| 综述 | 第207-269页 |
| 1. microRNAs 简介 | 第208-221页 |
| 2. microRNAs 与肿瘤 | 第221-237页 |
| 3. 展望 | 第237-239页 |
| 参考文献 | 第239-269页 |
| 致谢 | 第269-272页 |
| 附录 常规溶液配制 | 第272-277页 |
| 个人简历、在学期间发表的论文与研究成果 | 第277-282页 |
