| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-23页 |
| ·红笛鲷及其研究现状 | 第12页 |
| ·鱼类免疫系统及免疫机制研究概况 | 第12-16页 |
| ·鱼类的免疫器官和组织 | 第13-15页 |
| ·体液免疫因子 | 第15-16页 |
| ·CD40 分子的研究进展 | 第16-21页 |
| ·CD40 基因 | 第17页 |
| ·CD40 蛋白 | 第17-18页 |
| ·CD40 的表达与调控 | 第18页 |
| ·CD40L 基因 | 第18页 |
| ·CD40-CD40L 的相互作用 | 第18-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 2 红笛鲷 CD40 基因的克隆及序列特征分析 | 第23-40页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·实验用鱼 | 第23页 |
| ·质粒载体及受体菌 | 第23页 |
| ·细菌培养基的配制 | 第23页 |
| ·核酸电泳相关试剂 | 第23-24页 |
| ·实验仪器 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·生物信息学分析所用软件 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-32页 |
| ·红笛鲷头肾总 RNA 的提取 | 第25页 |
| ·红笛鲷 CD40 基因全长 cDNA 的扩增 | 第25-32页 |
| ·结果 | 第32-38页 |
| ·红笛鲷总 RNA 的提取 | 第32页 |
| ·cDNA 一链的合成 | 第32页 |
| ·CD40 基因的克隆结果与分析 | 第32-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 3 CD40 基因在红笛鲷中表达差异研究 | 第40-48页 |
| ·实验仪器及试剂 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-42页 |
| ·免疫实验免疫原的准备 | 第40页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第41页 |
| ·引物设计 | 第41页 |
| ·半定量检测 CD40 mRNA 表达谱 | 第41-42页 |
| ·quantitiative Real-Time PCR (qRT-PCR) | 第42页 |
| ·数据统计与分析 | 第42页 |
| ·实验结果 | 第42-46页 |
| ·红笛鲷 CD40 基因表达谱分析 | 第42-43页 |
| ·红笛鲷 CD40 基因在组织中表达模式分析 | 第43-46页 |
| ·红笛鲷 CD40 基因在淋巴细胞中的表达模式分析 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 4 红笛鲷 CD40 基因的原核表达 | 第48-60页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·载体和菌株 | 第48页 |
| ·仪器 | 第48页 |
| ·主要试剂和溶液 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-51页 |
| ·重组质粒的构建 | 第49页 |
| ·pET-32a(+)质粒的提取 | 第49页 |
| ·PCR 产物和 pET-32a(+)质粒双酶切及酶切产物纯化 | 第49-50页 |
| ·连接和转化 | 第50页 |
| ·重组质粒转入 Rosetta 表达菌 | 第50页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第50-51页 |
| ·重组融合蛋白 pET32-△△CD40 的提取与纯化 | 第51页 |
| ·Western blot 分析 | 第51页 |
| ·CD40 全基因和去除信号肽基因 mRNA 结构分析 | 第51页 |
| ·实验结果 | 第51-58页 |
| ·重组质粒的构建 | 第51-53页 |
| ·原核重组质粒的诱导表达 | 第53-54页 |
| ·融合蛋白在 Rosetta 中表达条件的优化 | 第54-56页 |
| ·重组蛋白 pET32-△△CD40 的纯化及定量 | 第56页 |
| ·重组质粒 pET32-△CD40 和 pET32-CD40 表达量的比较 | 第56-57页 |
| ·CD40 全基因和去除信号肽基因 mRNA 二级结构 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 5 鼠抗红笛鲷 CD40 多克隆抗体的制备及免疫组化分析 | 第60-68页 |
| ·实验材料 | 第60-61页 |
| ·实验动物 | 第60页 |
| ·细胞 | 第60页 |
| ·实验仪器 | 第60页 |
| ·主要试剂 | 第60页 |
| ·ELISA 所用溶液和试剂 | 第60-61页 |
| ·实验方法 | 第61-63页 |
| ·多克隆抗体的制备及效价测定 | 第61-62页 |
| ·抗血清的特异性检测 | 第62页 |
| ·抗体中和试验 | 第62页 |
| ·免疫组织化学分析 | 第62-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-66页 |
| ·鼠抗 CD40 多克隆抗体效价测定 | 第63页 |
| ·抗血清特异性检测 | 第63-64页 |
| ·抗体中和 | 第64-65页 |
| ·免疫组化分析 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| 6 结论 | 第68-69页 |
| ·红笛鲷 CD40 基因的克隆 | 第68页 |
| ·红笛鲷 CD40 基因差异表达分析 | 第68页 |
| ·红笛鲷 CD40 基因的原核表达 | 第68页 |
| ·红笛鲷 CD40 抗血清的制备及免疫组化分析 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-83页 |
| 附录 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 作者简介 | 第86-87页 |
| 导师简介 | 第87页 |
