| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 1 前言 | 第15-28页 |
| ·禽类黏膜免疫 | 第15-20页 |
| ·禽类黏膜免疫系统的组成和作用方式 | 第15-16页 |
| ·禽类黏膜免疫的特点与功能 | 第16-17页 |
| ·禽类消化道黏膜免疫 | 第17-18页 |
| ·禽类呼吸道黏膜免疫 | 第18-19页 |
| ·黏膜免疫与疫苗 | 第19-20页 |
| ·黏膜免疫佐剂 | 第20-22页 |
| ·细菌成分黏膜免疫佐剂 | 第20-21页 |
| ·核酸佐剂 | 第21页 |
| ·细胞因子佐剂 | 第21-22页 |
| ·IL-17 与黏膜免疫 | 第22-26页 |
| ·Th17 细胞的发现 | 第22-23页 |
| ·IL-17 和 IL-17 受体 | 第23-24页 |
| ·白介素 17 的生产 | 第24页 |
| ·IL-17 与病原微生物 | 第24-26页 |
| ·IL-17 与黏膜免疫 | 第26页 |
| ·禽类的 CD4 和 CD8 分子 | 第26-27页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-49页 |
| ·材料 | 第28-30页 |
| ·试验动物 | 第28页 |
| ·病毒、细胞、质粒和疫苗 | 第28页 |
| ·抗体和血清 | 第28页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第28-29页 |
| ·主要溶液及配置方法 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·主要生物信息学网站及分析软件 | 第30页 |
| ·试验一 GoIL-17、GoCD4 和 GoCD8α的克隆及序列分析 | 第30-36页 |
| ·东北白鹅胸腺中总 RNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·双链 cDNA 的合成 | 第31-32页 |
| ·GoIL-17 和 GoCD4、GoCD8α基因的克隆及鉴定 | 第32-35页 |
| ·GoIL-17 和 GoCD4、GoCD8α的生物信息学分析 | 第35-36页 |
| ·试验二 mGoIL-17 和 GoCD4、GoCD8α胞外区原核表达及多克隆抗体的制备 | 第36-38页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第37页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第38页 |
| ·试验三 mGoIL-17 和 mGoIL-17 融合 GPV-VP3 的表达及活性的测定 | 第38-45页 |
| ·重组转移载体的构建 | 第38-40页 |
| ·重组杆粒的获得及鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组杆状病毒的获得 | 第41-42页 |
| ·SDS-PAGE 及 Western blot 检测重组蛋白 IL-17 和 VP331 | 第42-43页 |
| ·纯化与复性 | 第43-44页 |
| ·mGoIL-17 和 mGoIL17-VP3 在鹅胚成纤维细胞上的活性测定 | 第44-45页 |
| ·试验四 mGoIL-17 黏膜佐剂效应的评估 | 第45-49页 |
| ·试验动物分组及免疫策略 | 第45-46页 |
| ·体液免疫评估 | 第46-47页 |
| ·外周血淋巴细胞中 CD4 和 CD8 细胞的检测 | 第47-48页 |
| ·数据统计分析 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-81页 |
| ·东北白鹅胸腺 RNA 的提取及双链 cDNA 的扩增 | 第49页 |
| ·东北白鹅 IL-17、CD4 和 CD8α的克隆及序列分析 | 第49-59页 |
| ·东北白鹅 IL-17、CD4 和 CD8α的克隆 | 第49页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第49-50页 |
| ·序列分析 | 第50-59页 |
| ·mGoIL-17 和 CD4、CD8α胞外区的原核表达 | 第59-65页 |
| ·mGoIL-17 和 CD4、CD8α胞外区原核表达 PCR | 第59-60页 |
| ·mGoIL-17、CD4 和 CD8α胞外区原核表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·mGoIL-17 和 CD4、CD8α胞外区蛋白的纯化和多抗的制备 | 第61-65页 |
| ·mGoIL-17 和 mGoIL-17 与 GPV-VP3 融合表达及其活性的测定 | 第65-73页 |
| ·mGoIL-17 和 IL-17 与 GPV-VP3 融合表达重组转移载体的构建 | 第65-67页 |
| ·重组杆粒的获得及 PCR 鉴定 | 第67-68页 |
| ·重组杆粒转染昆虫细胞后的细胞病变图 | 第68页 |
| ·重组蛋白的 SDS-PAGE 和 Western blot 检测 | 第68-70页 |
| ·重组蛋白的纯化和复性 | 第70-72页 |
| ·mGoIL-17 和 mGoIL17-VP3 在鹅胚成纤维细胞上的活性测定 | 第72-73页 |
| ·东北白鹅 IL-17 黏膜佐剂效应的评估 | 第73-81页 |
| ·体液免疫评估 | 第73-79页 |
| ·细胞免疫评估 | 第79-81页 |
| 4 讨论 | 第81-86页 |
| ·SMART 反转录酶扩增双链 cDNA | 第81页 |
| ·东北白鹅 IL-17、CD4 和 CD8 的克隆与分析 | 第81-82页 |
| ·免疫原的选择 | 第82页 |
| ·黏膜免疫佐剂的选择 | 第82-83页 |
| ·黏膜免疫途径的选择 | 第83-84页 |
| ·黏膜免疫和系统免疫 | 第84-85页 |
| ·黏膜免疫诱导的体液免疫 | 第84页 |
| ·黏膜免疫诱导的细胞免疫 | 第84-85页 |
| ·共同黏膜免疫系统 | 第85-86页 |
| 5 结论 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-100页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第100页 |
