| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-37页 |
| ·维生素C 功能研究 | 第14-19页 |
| ·植物维生素C 的生理功能 | 第14-15页 |
| ·维生素C 在植物体的抗氧化系统中起着重要的作用 | 第14页 |
| ·维生素C 对植物细胞分裂的影响 | 第14-15页 |
| ·维生素C 在光合作用（Photosynthesis ，PS）和光保护中起重要作用 | 第15页 |
| ·维生素C 在细胞壁代谢和细胞膨大中的作用 | 第15页 |
| ·AsA 与人体健康 | 第15-19页 |
| ·AsA 对机体运动具有重要的影响 | 第16-17页 |
| ·维生素C 的临床应用 | 第17-19页 |
| ·植物维生素C 合成代谢 | 第19-25页 |
| ·维生素C 合成现状 | 第19页 |
| ·植物维生素C 合成代谢途径 | 第19-21页 |
| ·植物维生素C 代谢与降解途径 | 第21-22页 |
| ·维生素C 合成与代谢相关基因 | 第22-25页 |
| ·L-半乳糖醛酸- γ-内酯脱氢酶( L-Galactono-γ-lactone dehydrogenase, GLDH) | 第22-23页 |
| ·L-半乳糖脱氢酶(L-galactose dehydrogenase, GalDH) | 第23页 |
| ·GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GDP-D-Manpyrophosphorylase, | 第23-24页 |
| ·GDP-D-甘露糖-3，5-表异构酶(GDP- DMan-3, 5- epimerase, | 第24页 |
| ·D-半乳糖醛酸还原酶(D-galacturonate reductase, GalUR) | 第24页 |
| ·L-半乳糖-1-磷酸化酶( L-Galactose-1-phosphatase, GalPPase) | 第24页 |
| ·抗坏血酸过氧化物酶（Ascorbate peroxidase, APX） | 第24-25页 |
| ·GMP 和GALP 基因研究进展 | 第25-26页 |
| ·维生素C 生物合成代谢调控 | 第26-30页 |
| ·提高AsA 的生物合成代谢流量 | 第26-27页 |
| ·降低AsA 的分解流向 | 第27页 |
| ·增加AsA 的再生流量 | 第27-28页 |
| ·引进外源基因调控辅助通路 | 第28页 |
| ·改变生化反应酶的亚细胞定位 | 第28页 |
| ·通过促进能量代谢优化AsA 代谢合成 | 第28-30页 |
| ·植物维生素C 与生菜营养品质的改良 | 第30-31页 |
| ·利用基因工程培育优良品种 | 第30-31页 |
| ·改善提高生菜营养品质和抗性 | 第31页 |
| ·作物转基因现状及安全性问题 | 第31-37页 |
| ·转基因生物技术研究与产业应用情况 | 第31-32页 |
| ·转基因安全性问题 | 第32-35页 |
| ·环境安全性 | 第32-33页 |
| ·食品安全性 | 第33-34页 |
| ·政治与经济方面 | 第34-35页 |
| ·转基因与社会伦理 | 第35页 |
| ·世界各国对转基因作物的管理 | 第35-36页 |
| ·转基因作物展望 | 第36-37页 |
| 第二章 材料与方法 | 第37-58页 |
| ·材料与试剂 | 第37-39页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·菌株与质粒 | 第37页 |
| ·细菌和植物培养基 | 第37-38页 |
| ·酶与试剂盒 | 第38页 |
| ·实验试剂 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-58页 |
| ·GMP 和基因的克隆及表达载体的构建 | 第39-46页 |
| ·拟南芥总RNA 的提取 | 第39-40页 |
| ·反转录合成cDNA | 第40页 |
| ·GMP 基因的分离、表达载体的构建 | 第40-45页 |
| ·GalPPase 基因的分离、表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第46-48页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第46页 |
| ·表达载体质粒转化大肠杆菌 | 第46-47页 |
| ·PCR 检测转化菌株 | 第47-48页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第48-49页 |
| ·提取含有目的基因的质粒 | 第48-49页 |
| ·冻融法转化根癌农杆菌 | 第49页 |
| ·农杆菌介导法转化生菜 | 第49-51页 |
| ·生菜无菌苗的快繁以及剪苗 | 第49-50页 |
| ·农杆菌的培养 | 第50页 |
| ·农杆菌侵染以及共培养 | 第50页 |
| ·选择培养 | 第50页 |
| ·生根培养 | 第50-51页 |
| ·移栽 | 第51页 |
| ·转基因生菜的PCR 检测 | 第51-53页 |
| ·CTAB 法提取生菜总DNA | 第51-52页 |
| ·PCR 检测转化生菜植株 | 第52-53页 |
| ·转基因生菜Southern 检测 | 第53-55页 |
| ·CTAB 法大量抽提生菜基因组DNA | 第53-54页 |
| ·生菜基因组DNA 的限制性酶切消化 | 第54页 |
| ·酶切产物的Southern 杂交 | 第54-55页 |
| ·转基因生菜中gmp 和galp 基因的RT-PCR 检测 | 第55页 |
| ·gmp 基因在不同胁迫诱导下的表达分析 | 第55-57页 |
| ·实验材料的准备 | 第55页 |
| ·不同的胁迫诱导条件 | 第55-56页 |
| ·生菜总RNA 提取和cDNA 反转录 | 第56页 |
| ·半定量PCR | 第56-57页 |
| ·转基因生菜叶片中维生素C 含量测定 | 第57-58页 |
| 第三章 结果分析 | 第58-69页 |
| ·拟南芥RNA 提取 | 第58页 |
| ·PCR 扩增回收目的基因 | 第58-59页 |
| ·将回收的目的片段克隆到pMD18-T Vector 并转化大肠杆菌DH5?感受态细胞 | 第59-60页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第60-63页 |
| ·提取含有目的基因的表达载体 | 第60页 |
| ·HindⅢ/BstEⅡ双酶切表达载体 pCAMBIA 2301-gmp-myc 和 pCAMBIA2301-galp-myc | 第60-61页 |
| ·PCR 检测转入大肠杆菌DH5?的表达载体 | 第61-62页 |
| ·工程菌（EHA105）的制备 | 第62-63页 |
| ·生菜的遗传转化 | 第63-64页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第64-65页 |
| ·转GalP 基因植株 Southern blot 分析 | 第65-66页 |
| ·转GMP 基因生菜RT-PCR 检测 | 第66-67页 |
| ·gmp 基因在不同胁迫诱导下的表达分析 | 第67-68页 |
| ·转基因植株维生素C 含量分析 | 第68-69页 |
| 第四章 讨论与小结 | 第69-74页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| ·生菜作为转化材料的可行性 | 第69页 |
| ·gdpmppase 和galppase 基因转化结果分析 | 第69-71页 |
| ·本工作创新点 | 第71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| ·后续工作展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 附录 | 第86-89页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第89页 |
