| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-29页 |
| ·CGT酶的概述 | 第16-20页 |
| ·CGT酶的发现及来源 | 第16-17页 |
| ·CGT酶的催化反应类型 | 第17-18页 |
| ·CGT酶的种类及其产物特性 | 第18-20页 |
| ·CGT酶的催化域 | 第20-27页 |
| ·CGT酶的三维结构 | 第20-21页 |
| ·CGT酶与底物的结合 | 第21-22页 |
| ·CGT酶与α-淀粉酶的关系 | 第22-23页 |
| ·CGT酶的分子改造研究进展 | 第23-27页 |
| ·CGT酶的研究意义 | 第27-28页 |
| ·CGT酶研究中存在的问题 | 第28页 |
| ·本论文的主要研究工作 | 第28-29页 |
| 第二章 α-CGT酶基因的克隆与表达 | 第29-49页 |
| ·引言 | 第29-30页 |
| ·材料与方法 | 第30-37页 |
| ·菌株与质粒 | 第30页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第31-32页 |
| ·α-CGT酶基因的克隆 | 第32页 |
| ·目的片段的纯化 | 第32-33页 |
| ·目的片段cgt与克隆载体pEASY-T1 Simple的连接 | 第33页 |
| ·转化 | 第33-34页 |
| ·质粒的提取 | 第34页 |
| ·重组质粒验证 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pEASY-T1 Simple/cgt及表达载体pET22(b+)、PQE30的双酶切 | 第35页 |
| ·重组质粒pET22(b+)/cgt、PQE30/cgt的构建 | 第35页 |
| ·工程菌E.coliBL21(DE3)(pET22(b+)/cgt)、E.coli M15(PQE30/cgt)的构建 | 第35页 |
| ·工程菌E.coliB1.21(DE3)(pET22(b+)/cgt)、E.coli M15(PQE30/cgt)的发酵培养 | 第35页 |
| ·重组α-CGT酶的活力测定 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-48页 |
| ·工程菌E.coliBL21(DE3)(pET22(b+)/cgt)、E.coli M15(PQE 30/cgt)的构建 | 第37-38页 |
| ·重组a-CGT酶在￡".co//BL21(DE3)(pET22(b+)/c奴)中的胞外表达条件优化 | 第38-43页 |
| ·重组α-CGT酶在E.coliM15(PQE30/cgt)中的胞内表达条件优化 | 第43-45页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第45-48页 |
| ·本章小结 | 第48-49页 |
| 第三章 重组α-CGT酶的产物专一性分析 | 第49-55页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·材料与方法 | 第49-50页 |
| ·菌株 | 第49页 |
| ·试剂与仪器 | 第49-50页 |
| ·分析方法 | 第50-51页 |
| ·重组α-CGT酶转化1%可溶性淀粉生产α-CD | 第50页 |
| ·重组α-CGT酶转化2%可溶性淀粉生产α-CD | 第50页 |
| ·重组α-CGT酶催化生淀粉的能力 | 第50-51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-54页 |
| ·重组α-CGT酶转化1%底物淀粉生产α-CD | 第51页 |
| ·重组α-CGT酶转化2%的底物淀粉生产α-CD | 第51-52页 |
| ·重组α-CGT酶催化生淀粉的能力 | 第52-54页 |
| ·本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 α-CGT酶的产物专一性改造 | 第55-73页 |
| ·引言 | 第55-57页 |
| ·材料与方法 | 第57-63页 |
| ·菌株与质粒 | 第57页 |
| ·酶与试剂 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57-58页 |
| ·培养基 | 第58页 |
| ·易错PCR扩增目的片段 | 第58页 |
| ·突变文库的构建 | 第58-59页 |
| ·高产物专一性重组菌株的初步筛选 | 第59页 |
| ·HPLC分析突变体α-CGT酶产物专一性 | 第59页 |
| ·突变位点的突变位点分析 | 第59-60页 |
| ·突变菌株第167位点饱和突变 | 第60-61页 |
| ·二次突变及突变文库的构建 | 第61页 |
| ·突变α-CGT酶的纯化 | 第61-62页 |
| ·突变a-CGT酸的分析方法. | 第62-63页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第63页 |
| ·突变α-CGT酶学性质测定 | 第63页 |
| ·pH对野生、重组及突变α-CGT酶活力影响 | 第63页 |
| ·阳离子对突变α-CGT酶活力影响的测定 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-71页 |
| ·易错PCR扩增及突变文库的构建 | 第63-64页 |
| ·高产物专一性α-CGT酶的筛选 | 第64-65页 |
| ·重组a-CGT酶与突变a-CGT酶产物转化情况分析 | 第65页 |
| ·淀粉浓度对突变a-CGT酶产物专一性的影响 | 第65-66页 |
| ·突变菌株第167位的饱和突变 | 第66-67页 |
| ·野生型和突变型a-CGT酶模型构建 | 第67-68页 |
| ·突变a-CGT酶的纯化 | 第68-69页 |
| ·突变a-CGT酶的酶学性质分析 | 第69-71页 |
| ·本章小结 | 第71-73页 |
| 结论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 发表论文 | 第83-84页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第84页 |
