| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 第一章 国内外研究评述 | 第10-24页 |
| ·青蒿素的研究概况 | 第10-18页 |
| ·青蒿素的历史和来源 | 第10-12页 |
| ·青蒿素的生物合成途径研究现状 | 第12-13页 |
| ·青蒿素前体转化成青蒿素的不同假说 | 第13-17页 |
| ·青蒿素合成基因表达的时空调节 | 第17-18页 |
| ·环境胁迫促进植物次生代谢物生产的研究进展 | 第18-24页 |
| ·诱导条件的分类和应用 | 第18-21页 |
| ·胁迫信号在青蒿素高产效应中的应用 | 第21-24页 |
| 第二章 青蒿CYP71AV1和CPR基因克隆及测序 | 第24-33页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·植物材料 | 第24页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24-25页 |
| ·仪器 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-30页 |
| ·青蒿材料的预处理 | 第25页 |
| ·DNA提取 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR产物纯化及TA克隆 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备与转化 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的鉴定与测序 | 第29-30页 |
| ·结果 | 第30-31页 |
| ·CYP71AV1、CPR基因的PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·CYP71AV1、CPR cDNA克隆与测序 | 第31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 冷胁迫诱导ADS、CYP71AV1、CPR基因表达 | 第33-41页 |
| ·材料和方法 | 第33-37页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·青蒿材料的冷胁迫处理 | 第33页 |
| ·RNA提取 | 第33-34页 |
| ·ADS、CYP71AV1、CPR的RT-CR扩增 | 第34-36页 |
| ·阳性克隆的筛选、酶切鉴定及序列测定 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-39页 |
| ·ADS、CYP71AV1和CPR基因扩增 | 第37-38页 |
| ·阳性克隆筛选、酶切鉴定和测序 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 冷胁迫介导Ca~(2+)依赖信号转导机制 | 第41-45页 |
| ·材料和方法 | 第41-42页 |
| ·青蒿试管苗:由本实验室培育 | 第41页 |
| ·Ca~(2+)通道抑制剂氯化镧(LaCl_3)和低温协同处理 | 第41页 |
| ·Ca~(2+)螯合剂EGTA和低温协同处理 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-43页 |
| ·Ca~(2+)通道抑制剂及Ca~(2+)螯合剂协同阻遏冷胁迫诱导基因表达 | 第42-43页 |
| ·无培养基条件下Ca~(2+)螯合剂阻遏冷胁迫诱导基因表达 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第五章 冷胁迫后ADS和CYP71AV1的浓度变化 | 第45-54页 |
| ·材料和方法 | 第45-48页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·冷处理方法 | 第45页 |
| ·蛋白质的提取 | 第45-46页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第46-47页 |
| ·ELISA检测 | 第47-48页 |
| ·统计分析 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-52页 |
| ·重组蛋白含量测定 | 第48页 |
| ·ELISA检测标准曲线 | 第48-50页 |
| ·转基因青蒿中ADS、CYP、CPR的含量变化 | 第50页 |
| ·冷处理青蒿中ADS、CYP、CPR的上调 | 第50-51页 |
| ·不同冷处理后青蒿中ADS和CYP的含量变化 | 第51页 |
| ·ADS、CYP、CPR合成中可能涉及的发育调节机制 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第六章 冷胁迫对青蒿素含量的影响 | 第54-58页 |
| ·材料和方法 | 第54-55页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·HPLC法测量青蒿素含量 | 第54-55页 |
| ·结果与分析 | 第55-57页 |
| ·青蒿素含量的标准曲线 | 第55-56页 |
| ·青蒿样品的青蒿素含量测定 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 结论与展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
