| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| ·概述 | 第12-13页 |
| ·MIF的功能研究 | 第13-15页 |
| ·MIF基因的结构 | 第13页 |
| ·MIF蛋白质的结构 | 第13-14页 |
| ·MIF的组织来源 | 第14-15页 |
| ·MIF的表达调控 | 第15-19页 |
| ·MIF与受体作用 | 第15页 |
| ·MIF与MCP-1的关系 | 第15-16页 |
| ·MIF与JAB-1/Ap-1途径 | 第16页 |
| ·MIF对p53的调节 | 第16-17页 |
| ·MIF对糖皮质激素作用的调节 | 第17-19页 |
| ·与疾病的关系 | 第19-21页 |
| ·MIF与炎症反应 | 第19-20页 |
| ·MIF与肥胖综合征 | 第20页 |
| ·MIF与肿瘤 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的意义 | 第21-22页 |
| 2 实验材料与方法 | 第22-39页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·RNA样品 | 第22页 |
| ·DNA样品 | 第22页 |
| ·用于组织分布和基因片段分离cDNA样品 | 第22页 |
| ·用于基因片段分离的模板基因组DNA样品 | 第22页 |
| ·用于基因染色体定位的DNA样品 | 第22页 |
| ·载体及菌株 | 第22-23页 |
| ·工具酶、试剂盒和生化试剂 | 第23页 |
| ·主要培养基和溶液的配制 | 第23-24页 |
| ·细菌培养基的配制 | 第23-24页 |
| ·细胞培养基的配制 | 第24页 |
| ·缓冲液配制 | 第24页 |
| ·质粒抽提相关溶液配制 | 第24页 |
| ·制备感受态细胞所用试剂 | 第24页 |
| ·罗格列酮的配制 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| ·主要分子生物学软件 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-39页 |
| ·总RNA的提取、纯化处理及鉴定 | 第25-28页 |
| ·组织总RNA的提取(参照Invitrogon Trizol说明书) | 第25-26页 |
| ·细胞总RNA的提取(参照Shanghai Sangon Trizol说明书) | 第26页 |
| ·组织总RNA的纯化处理(参照DNase I说明书) | 第26-27页 |
| ·总RNA纯度鉴定及含量测定 | 第27页 |
| ·cDNA的合成(参照M-MuLV逆转录酶说明书) | 第27-28页 |
| ·组织总DNA的提取 | 第28页 |
| ·猪MIF基因的克隆 | 第28-30页 |
| ·克隆猪MIF基因cDNA片断 | 第28-29页 |
| ·用3'-Rapid Amplification of cDNA Ends(3'-RACE)方法获取猪MIF基因的全长cDNA | 第29-30页 |
| ·猪MIF基因内含子序列的扩增 | 第30页 |
| ·猪MIF基因启动子的克隆 | 第30页 |
| ·PCR扩增产物的纯化、连接和转化 | 第30-33页 |
| ·用DNA回收试剂盒回收DNA片段 | 第30-31页 |
| ·DNA特异片段连接载体 | 第31页 |
| ·感受态细胞制备及转化 | 第31-33页 |
| ·质粒的检测与测序 | 第33-34页 |
| ·质粒的小量抽提:碱裂解法 | 第33页 |
| ·连接质粒的双酶切检测与测序 | 第33-34页 |
| ·DNA序列同源性检索鉴定 | 第34页 |
| ·序列比对与进化分析 | 第34页 |
| ·猪MIF基因的染色体定位 | 第34-35页 |
| ·染色体定位所用引物的设计 | 第34-35页 |
| ·染色体定位所扩增片断大小及PCR反应条件 | 第35页 |
| ·PCR扩增条带分型方法 | 第35页 |
| ·数据分析方法 | 第35页 |
| ·RealTime-PCR检测猪MIF基因的组织表达谱 | 第35-36页 |
| ·组织表达谱的引物设计 | 第35页 |
| ·MIF和GAPDH基因扩增的RealTime-PCR反应条件 | 第35页 |
| ·RealTime-PCR结果数据分析 | 第35-36页 |
| ·细胞培养 | 第36页 |
| ·药物刺激 | 第36页 |
| ·细胞转染 | 第36-38页 |
| ·质粒的大量抽提 | 第36-37页 |
| ·转染 | 第37-38页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第38页 |
| ·以β-actin为内参用RealTime-PCR检测MIF的表达量 | 第38页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-53页 |
| ·猪MIF基因全长编码区cDNA和基因组DNA的克隆 | 第39-40页 |
| ·猪MIF基因基因组DNA结构分析与系统进化树的构建 | 第40-43页 |
| ·猪MIF基因基因组DNA结构分析 | 第40-41页 |
| ·系统进化树的构建 | 第41-43页 |
| ·MIF基因的染色体定位 | 第43-45页 |
| ·MIF基因的组织表达谱 | 第45-46页 |
| ·真核表达载体的构建及其融合蛋白的体外表达 | 第46-47页 |
| ·pIRES2-EPFP载体的构建 | 第46-47页 |
| ·融合蛋白的体外表达 | 第47页 |
| ·猪MIF基因启动子区的克隆,PGL3载体的构建及启动子活性的检测 | 第47-51页 |
| ·猪MIF基因启动子区的克隆 | 第47-48页 |
| ·猪MIF基因启动子区转录因子结合位点的预测 | 第48-49页 |
| ·pGL3载体的构建 | 第49-50页 |
| ·猪MIF启动子活性的检测 | 第50-51页 |
| ·PPARr2对MIF的转录调控影响 | 第51-53页 |
| ·不同浓度的罗格列酮处理对PPARγ2和MIF基因表达的影响 | 第51-52页 |
| ·在NIH3T3细胞系中超表达pcDNA3.1-PPARγ对MIF基因表达的影响 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| ·猪MIF基因的结构特征、氨基酸序列及亲缘关系比较 | 第53页 |
| ·猪MIF在染色体上定位 | 第53-54页 |
| ·猪MIF的组织表达 | 第54页 |
| ·猪MIF基因启动子 | 第54-55页 |
| ·PPARr2对MIF转录调控的影响 | 第55-56页 |
| 5 结论与创新 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 研究生在读期间论文发表情况 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录 | 第70-71页 |
| 1 MIF基因组序列 | 第70页 |
| 2 MIF启动子序列 | 第70-71页 |
