| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1 RD技术概况 | 第14-17页 |
| 2 RD技术的应用 | 第17-19页 |
| ·筛选目标蛋白 | 第17-18页 |
| ·实现蛋白质的体外进化 | 第18-19页 |
| 3 RD技术的前景与展望 | 第19-20页 |
| 4 CL检测方法的研究进展 | 第20-22页 |
| ·HPLC法 | 第20页 |
| ·CG-MS法 | 第20页 |
| ·CE法 | 第20-21页 |
| ·IA法 | 第21-22页 |
| ·RIA法 | 第21页 |
| ·EIA法 | 第21页 |
| ·DIGFA法 | 第21-22页 |
| ·BS法 | 第22页 |
| 5 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 6 技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 ScFv文库的构建 | 第24-41页 |
| 1 材料与方法 | 第24-34页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-34页 |
| ·Trizol法提取鼠脾总RNA | 第25-26页 |
| ·ScFv文库的构建 | 第26-34页 |
| ·构建基因结构图 | 第26页 |
| ·PCR过程中所用引物 | 第26-30页 |
| ·RD元件的扩增及DNA文库全长的连接 | 第30-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-39页 |
| ·小鼠脾脏总RNA的提取 | 第34页 |
| ·RD元件的扩增及DNA文库全长的拼接 | 第34-38页 |
| ·VH、VL、P以及T的连接 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| ·小鼠RNA提取 | 第39页 |
| ·RD元件的扩增和连接 | 第39-41页 |
| 第三章 ScFv文库的质量鉴定 | 第41-49页 |
| 1 材料与方法 | 第41-44页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·主要仪器 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-44页 |
| ·ScFv文库的完整性与多样性鉴定 | 第42-43页 |
| ·DH5α感受态制备 | 第42页 |
| ·ScFv文库测序 | 第42-43页 |
| ·ScFv文库容量的鉴定 | 第43页 |
| ·ScFv文库的可扩增性鉴定 | 第43-44页 |
| ·ScFv文库的转录活性与反转录活性鉴定 | 第44页 |
| ·蛋白质水平鉴定 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-48页 |
| ·ScFv文库的测序 | 第44-46页 |
| ·ScFv抗体库容量 | 第46页 |
| ·转录活性鉴定 | 第46页 |
| ·反转录活性鉴定 | 第46-47页 |
| ·蛋白质水平鉴定 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-49页 |
| 第四章 CL全抗原的合成和抗体的筛选 | 第49-66页 |
| 1 材料与方法 | 第49-59页 |
| ·材料 | 第49-51页 |
| ·主要试剂 | 第49-50页 |
| ·主要仪器 | 第50-51页 |
| ·方法 | 第51-55页 |
| ·重氮化法合成CL包被原 | 第51页 |
| ·CL包被原的鉴定 | 第51-52页 |
| ·ScFv文库的体外转录与翻译 | 第52-53页 |
| ·ScFv文库的体外筛选 | 第53页 |
| ·mRNA的纯化 | 第53-54页 |
| ·RT-PCR重新构建RD模板 | 第54-55页 |
| ·mRNA反转录 | 第54-55页 |
| ·HLP片断的扩增 | 第55页 |
| ·THLP的连接 | 第55页 |
| ·抗体片段的可溶性表达 | 第55-56页 |
| ·ELISA的交叉反应实验 | 第56-57页 |
| ·ELISA最佳实验条件的确定 | 第57页 |
| ·竞争ELISA的标准曲线 | 第57-59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-64页 |
| ·CL全抗原的合成 | 第59-60页 |
| ·体外筛选 | 第60-61页 |
| ·筛选后的鉴定 | 第61-62页 |
| ·表达产物特性初步分析 | 第62-64页 |
| ·SDS-PAGE和Western-blotting鉴定表达蛋白 | 第62页 |
| ·ELISA测定交叉反应 | 第62-63页 |
| ·方阵滴定实验 | 第63-64页 |
| ·竞争ELISA的标准曲线 | 第64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第66-73页 |
| 1 结论 | 第66-68页 |
| ·ScFv文库的构建 | 第66页 |
| ·ScFv文库的鉴定 | 第66-67页 |
| ·CL全抗原的合成 | 第67页 |
| ·体外转录翻译与ScFv的筛选 | 第67-68页 |
| 2 讨论 | 第68-73页 |
| ·ScFv | 第68页 |
| ·抗体库技术 | 第68-70页 |
| ·RD模板的构建 | 第70-71页 |
| ·体外翻译 | 第71页 |
| ·体外筛选 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 附录 | 第79页 |