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“高热病”猪群中PRRSV流行株的研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-15页
第一章 猪繁殖与呼吸综合征及其病原的研究进展第15-39页
   ·猪繁殖与呼吸综合征病毒的起源和分类第15-16页
   ·猪繁殖与呼吸综合征病毒生物学特性第16-18页
     ·病毒的形态特征第16页
     ·病毒的侵入和释放第16-17页
     ·病毒的培养特性第17页
     ·病毒的抵抗力第17页
     ·病毒的血凝特性第17-18页
   ·猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究第18-28页
     ·病毒的基因组结构与特点第18页
     ·病毒基因组编码的蛋白的结构和功能第18-23页
     ·病毒的复制特点第23页
     ·PRRSV 的分子遗传变异第23-26页
     ·P RRSV 的流行病学研究第26页
     ·宿主因素第26页
     ·病毒因素第26页
     ·疫苗因素第26-27页
     ·饲养管理与环境因素的影响第27-28页
   ·PRRS 的临床症状第28-29页
   ·PRRS 发生后猪的组织病理学变化第29-30页
     ·胎儿、新生仔猪第29页
     ·哺乳仔猪第29页
     ·母猪第29-30页
   ·诊断研究第30-33页
     ·病毒分离第30页
     ·抗原检测第30-31页
     ·血清学试验检测抗体第31页
     ·分子生物学检测方法第31-33页
   ·免疫学研究第33-37页
     ·感染免疫反应第33-34页
     ·对免疫细胞的影响第34页
     ·体液免疫第34-35页
     ·细胞免疫第35页
     ·细胞因子的产生第35-36页
     ·抗体依赖性增强作用第36-37页
   ·PRRSV 与其他病原体的相互作用第37页
   ·疫苗免疫及防制策略第37-39页
第二章 2006 年“猪高热病”的概况第39-43页
   ·“猪高热病”概况第39-41页
     ·2006 年“猪高热病”病情进展第39页
     ·“猪高热病”的流行病学调查第39-40页
     ·“高热病”病猪主要临床症状第40页
     ·“高热病”病猪剖检病变第40页
     ·“猪高热病”流行的诱因第40-41页
     ·“猪高热病”造成的负面影响第41页
     ·“猪高热病”的诊断和治疗第41页
   ·“猪高热病”病原研究进展第41-43页
第三章 “高热病”猪群中PRRSV 的调查与其流行毒株的分离第43-50页
   ·试验材料第43-44页
     ·主要试验仪器第43页
     ·主要试剂第43-44页
     ·细胞与阳性对照病毒株第44页
   ·试验方法第44-46页
     ·培养基的配制第44页
     ·引物设计第44页
     ·病例与猪群的调查第44页
     ·病料的采集及处理第44页
     ·血清中PRRSV 抗体的检测第44-45页
     ·病料中PRRSV 的检测第45页
     ·细胞培养第45页
     ·病毒分离第45-46页
   ·结果第46-48页
     ·血清样品中PRRSV 抗体的检测第46页
     ·病料样品中PRRSV RT-PCR 结果第46页
     ·病毒分离第46-48页
   ·讨论第48-50页
第四章 PRRSV 流行株JIANGXI-3 的全基因组序列分析第50-72页
   ·试验材料第50-51页
     ·主要仪器第50页
     ·试剂和耗材第50-51页
     ·毒株、菌种和质粒第51页
   ·实验方法第51-55页
     ·培养基的配制第51页
     ·引物设计第51-52页
     ·病毒RNA 的提取第52页
     ·各段基因的扩增第52-53页
     ·RT-PCR 产物的鉴定第53页
     ·纯化回收CDNA 片段第53页
     ·纯化产物与PMD 18-T VECTOR 连接第53页
     ·感受态细胞的制备(CACL2 法)第53-54页
     ·连接产物的转化第54页
     ·重组质粒的提取第54-55页
     ·重组质粒的鉴定第55页
     ·重组质粒的测序分析第55页
     ·本研究分离毒株全基因组序列变异分析第55页
   ·结果第55-70页
     ·全基因组多个片断的扩增及阳性克隆鉴定第55-57页
     ·序列测定与分析第57-70页
   ·讨论第70-72页
第五章 PRRSV 流行株NSP2、ORF5、ORF3 基因的序列分析第72-78页
   ·实验材料第72-73页
     ·毒株、菌种和质粒第72页
     ·试剂和耗材第72页
     ·主要仪器第72-73页
   ·实验方法第73-74页
     ·引物设计第73页
     ·病毒的增殖第73页
     ·病毒RNA 的提取第73页
     ·RT-PCR第73页
     ·RT-PCR 产物的鉴定第73页
     ·纯化回收CDNA 片段第73页
     ·纯化产物与PMD 18-T VECTOR 连接第73页
     ·感受态细胞的制备(CACL2 法)第73页
     ·连接产物的转化第73页
     ·重组质粒的提取第73-74页
     ·重组质粒的鉴定第74页
     ·分离毒株ORF3、ORF5、NSP2 序列分析第74页
   ·结果第74-76页
     ·病毒的增殖第74页
     ·ORF3、NSP2 和ORF5 基因的克隆测序第74页
     ·NSP2 基因变异缺失区序列分析第74-75页
     ·所测毒株ORF5 基因的同源性分析第75-76页
     ·ORF3 基因序列分析第76页
   ·讨论第76-78页
第六章 上述PRRSV NSP2 缺失株检测方法的建立第78-83页
   ·试验材料第78页
     ·细胞及毒株第78页
     ·主要试剂第78页
     ·主要仪器第78页
   ·试验方法第78-79页
     ·引物设计第78-79页
     ·病毒RNA 的制备第79页
     ·RT-PCR 扩增第79页
     ·特异性试验第79页
     ·敏感性试验第79页
     ·灵敏度试验第79页
   ·结果第79-81页
     ·PCR 扩增条件的优化第79页
     ·特异性试验第79-80页
     ·敏感性试验第80-81页
     ·灵敏度试验第81页
   ·讨论第81-83页
第七章 猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的致病性试验第83-91页
   ·试验材料第83页
     ·毒株第83页
     ·试剂第83页
     ·试验动物第83页
   ·试验方法第83-84页
     ·病毒增殖第83-84页
     ·病毒TCID_(50) 的测定第84页
     ·致病性试验第84页
   ·结果第84-88页
     ·病毒的增殖第84页
     ·TCID_(50) 测定第84-85页
     ·致病性试验第85-88页
   ·讨论第88-91页
第八章 PRRSV 流行株JIANGXI-3 灭活疫苗的效果评价第91-109页
   ·试验材料第91页
     ·毒株第91页
     ·试剂第91页
     ·试验动物第91页
   ·试验方法第91-93页
     ·病毒增殖第91页
     ·病毒TCID_(50) 的测定第91-92页
     ·JIANGXI-3 毒株的6 月龄猪的攻毒试验第92页
     ·JIANGXI-3 毒株的LD_(50) 的测定第92页
     ·灭活疫苗的研制第92页
     ·灭活疫苗的效果评价第92-93页
   ·结果第93-105页
     ·JIANGXI-3 9 代的TCID_(50) 测定第93页
     ·6 月龄猪试验结果第93-95页
     ·LD_(50) 试验的结果第95-97页
     ·LD_(50) 试验后存活猪的再次攻毒试验结果第97-98页
     ·灭活疫苗的免疫效果评价试验结果第98-105页
   ·讨论第105-109页
     ·临床症状第105-106页
     ·解剖病变和病理变化第106页
     ·抗原的变化第106页
     ·抗体的变化第106-109页
结论第109-110页
参考文献第110-122页
附录1 动物试验部分照片第122-124页
附录2 部分毒株的基因登录结果第124-136页
致谢第136-137页
作者简介第137页

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