| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-23页 |
| ·几丁质 | 第14-15页 |
| ·几丁质简介 | 第14-15页 |
| ·几丁质降解酶系 | 第15-17页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶 | 第15-16页 |
| ·几丁质酶 | 第16页 |
| ·几丁质脱乙酰基酶 | 第16-17页 |
| ·应用及前景 | 第17页 |
| ·国内外研究现状 | 第17-20页 |
| ·昆虫几丁质降解酶cDNA的克隆 | 第17-19页 |
| ·昆虫几丁质降解酶基因在虫体内的表达 | 第19页 |
| ·昆虫几丁质降解酶基因的体外表达 | 第19页 |
| ·昆虫几丁质降解酶的基因的拷贝数研究 | 第19-20页 |
| ·应用昆虫几丁质降解酶的研究展望 | 第20页 |
| ·三种鳞翅目昆虫介绍 | 第20-21页 |
| ·本论文研究的目的和意义 | 第21页 |
| ·研究目的 | 第21页 |
| ·研究意义 | 第21页 |
| ·本研究课题的来源及主要研究内容 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-37页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·菌株与质粒 | 第23页 |
| ·分子生物学用酶及试剂盒和各种试剂 | 第23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·仪器设备 | 第23-24页 |
| ·昆虫来源 | 第24页 |
| ·研究方法 | 第24-32页 |
| ·总RNA提取 | 第24-25页 |
| ·利用RT-PCR扩增保守区之间的cDNA序列 | 第25-28页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第26页 |
| ·PCR反应 | 第26-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| ·DNA回收 | 第27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·JM109感受态细胞制备 | 第27页 |
| ·E.coli的转化 | 第27-28页 |
| ·RACE引物设计 | 第28-29页 |
| ·3'-RACE的试验步骤 | 第29页 |
| ·5'-RACE的试验步骤 | 第29-31页 |
| ·全长cDNA的获取及其序列分析 | 第31-32页 |
| ·cDNA序列分析 | 第32页 |
| ·利用Blast软件进行序列相似性检索 | 第32页 |
| ·分子质量、碱基组成、碱基分布 | 第32页 |
| ·全长cDNA可读框架分析 | 第32页 |
| ·对ORF进行限制性酶切分析 | 第32页 |
| ·核酸序列对齐分析的功能预测 | 第32页 |
| ·蛋白质基本性质分析 | 第32-33页 |
| ·信号肽分析 | 第33页 |
| ·蛋白质功能预测 | 第33页 |
| ·蛋白质序列同源性分析及蛋白质功能预测 | 第33页 |
| ·结构位点、结构功能域数据库的蛋白质功能预测 | 第33页 |
| ·蛋白质结构预测 | 第33页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第33页 |
| ·蛋白质三级结构预测 | 第33页 |
| ·不同生长发育时期β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因表达水平研究 | 第33页 |
| ·总RNA的提取 | 第33页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第33页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达研究 | 第33-37页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因cDNA序列ORF的PCR反应 | 第34页 |
| ·PCR产物酶切反应 | 第34页 |
| ·E.coli质粒DNA提取和酶切 | 第34页 |
| ·大肠杆菌表达载体构建 | 第34页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因在大肠杆菌中诱导表达 | 第34-35页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第35-37页 |
| 3 结果 | 第37-67页 |
| ·几丁质降解酶RNA的提取 | 第37页 |
| ·RNA完整性的检测 | 第37页 |
| ·纯度及产量检测 | 第37页 |
| ·RT-PCR得到几丁质降解酶的基因特异性片段及序列分析 | 第37-39页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶的基因特异性片段及序列分析 | 第37-38页 |
| ·几丁质酶的基因特异性片段及序列分析 | 第38页 |
| ·几丁质脱乙酰基酶的基因特异性片段及序列分析 | 第38-39页 |
| ·基因cDNA序列的3'-RACE结果 | 第39-40页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因cDNA序列的3'-RACE结果 | 第39页 |
| ·几丁质酶基因cDNA序列的3'-RACE结果 | 第39-40页 |
| ·几丁质脱乙酰基酶基因cDNA序列的3'-RACE结果 | 第40页 |
| ·几丁质降解酶基因cDNA序列的5'-RACE结果 | 第40-41页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶cDNA序列的5'-RACE结果 | 第40-41页 |
| ·几丁质酶基因cDNA序列的5'-RACE结果 | 第41页 |
| ·几丁质降解酶基因cDNA序列的获得 | 第41-46页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因cDNA序列和氨基酸序列 | 第41-42页 |
| ·几丁质酶基因全长cDNA序列和氨基酸序列 | 第42-45页 |
| ·几丁质脱乙酰基酶基因cDNA序列和氨基酸序列 | 第45-46页 |
| ·三种几丁质降解酶基因特征 | 第46-50页 |
| ·碱基序列组成分析 | 第46-47页 |
| ·氨基酸序列组成分析 | 第47-49页 |
| ·信号肽分析 | 第49-50页 |
| ·氨基酸结构域预测 | 第50-54页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶氨基酸结构域预测 | 第50-52页 |
| ·几丁质酶氨基酸结构域预测 | 第52-54页 |
| ·几丁质脱乙酰基酶氨基酸结构域预测 | 第54页 |
| ·几丁质降解酶氨基酸的疏水性分析 | 第54-56页 |
| ·序列同源性比较 | 第56-66页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因与其它昆虫同源性比较 | 第56-58页 |
| ·几丁质酶基因与其它几种鳞翅目昆虫的同源性比较 | 第58-60页 |
| ·几丁质脱乙酰基酶基因与其它昆虫相应片段的同源性比较 | 第60-61页 |
| ·聚类分析 | 第61-66页 |
| ·八字地老虎β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因表达水平研究 | 第66页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第66-67页 |
| ·大肠杆菌重组表达载体的构建和鉴定 | 第66页 |
| ·β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因在大肠杆菌中的融合表达 | 第66-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| ·关于几丁质降解酶拷贝数的探讨 | 第67页 |
| ·八字地老虎β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第67页 |
| ·八字地老虎β-N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因mRNA表达水平研究探讨 | 第67-68页 |
| ·几丁质降解酶基因用途探讨 | 第68-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第74页 |
