| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| ·微生物冶金 | 第11-14页 |
| ·微生物冶金的定义 | 第11页 |
| ·微生物冶金的特点 | 第11-12页 |
| ·微生物冶金的反应机理 | 第12-14页 |
| ·元素硫的化学特性与生物浸出的关联性 | 第14页 |
| ·嗜酸硫氧化细菌系统多样性 | 第14-17页 |
| ·嗜酸硫氧化细菌的硫氧化系统 | 第17-25页 |
| ·硫的化学形态 | 第17-18页 |
| ·嗜酸硫氧化细菌硫氧化系统的特点 | 第18-19页 |
| ·嗜酸硫氧化细菌对元素硫的吸附 | 第19页 |
| ·元素硫活化转运模式的提出 | 第19-21页 |
| ·硫氧化酶系的研究 | 第21-25页 |
| ·本论文的研究目的和意义 | 第25页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第25-26页 |
| ·本论文课题资助情况 | 第26-27页 |
| 第二章 元素硫基质中嗜酸氧化亚铁硫杆菌胞外蛋白质表达图谱 | 第27-34页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·菌株与培养基 | 第27页 |
| ·Bradford法测定蛋白质浓度和二苯胺测定DNA含量 | 第27-28页 |
| ·蛋白质双向电泳 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-32页 |
| ·A.ferrooxidans胞外蛋白质的提取与分离 | 第28-30页 |
| ·A.ferrooxidans胞外蛋白质的双向电泳 | 第30-32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-33页 |
| ·A.ferrooxidans胞外蛋白质提取方法比较 | 第32页 |
| ·A.ferrooxidans胞外蛋白质电泳展示 | 第32-33页 |
| ·本章小结 | 第33-34页 |
| 第三章 硫基质中嗜酸氧化亚铁硫杆菌胞外高表达蛋白质组的初步研究 | 第34-45页 |
| ·实验材料 | 第34-35页 |
| ·菌株、培养基和培养条件 | 第34页 |
| ·蛋白质双向电泳 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-36页 |
| ·不同能源基质生长的A.ferrooxidans胞外蛋白质的提取 | 第35页 |
| ·不同能源基质生长的A.ferrooxidans胞外蛋白质差异展示 | 第35页 |
| ·胶内酶解与质谱分析 | 第35-36页 |
| ·数据库检索鉴定蛋白质 | 第36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-44页 |
| ·Fe~(2+)和S~0中生长的A.ferrooxidans胞外蛋白质的电泳展示 | 第36-39页 |
| ·MALDI-TOF/TOF分析及数据库查询 | 第39-41页 |
| ·元素硫基质中生长的A.ferrooxidans胞外蛋白质的分类与分析 | 第41-44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 嗜酸氧化亚铁硫杆菌硫活化相关胞外蛋白质基因的分析和验证 | 第45-57页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·菌株与培养基 | 第45页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-52页 |
| ·总RNA的提取及纯化 | 第46-47页 |
| ·反转录cDNA合成 | 第47-48页 |
| ·PCR引物设计及标准曲线的制作 | 第48-52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-56页 |
| ·引物特异性 | 第52页 |
| ·总RNA质量分析 | 第52-53页 |
| ·cDNA质量分析 | 第53-54页 |
| ·Real-time PCR用于对硫活化相关功能基因的验证结果分析 | 第54-56页 |
| ·本章小结 | 第56-57页 |
| 第五章 硫活化相关胞外蛋白质的原核表达、纯化及其功能验证 | 第57-74页 |
| ·实验材料 | 第57-61页 |
| ·菌种 | 第57页 |
| ·培养基 | 第57-58页 |
| ·At.ferrooxidans菌基因组抽提试剂 | 第58页 |
| ·PCR产物回收 | 第58页 |
| ·DNA快速纯化回收 | 第58页 |
| ·质粒提取试剂 | 第58-59页 |
| ·不连续体系SDS-PAGE电泳 | 第59-60页 |
| ·蛋白亲和纯化试剂 | 第60-61页 |
| ·实验方法 | 第61-67页 |
| ·DNA提取 | 第61页 |
| ·引物和PCR扩增 | 第61-62页 |
| ·表达载体的构建和目标蛋白质的表达 | 第62-65页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第65-66页 |
| ·含硫模式化合物 | 第66页 |
| ·XANES光谱测定 | 第66-67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-72页 |
| ·A.ferrooxidans中菌毛蛋白AFE_2621基因的克隆 | 第67页 |
| ·连接反应及阳性克隆的筛选 | 第67-68页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE | 第68-69页 |
| ·UV/Vis分析菌毛蛋白 | 第69页 |
| ·亚铁和单质硫中生长细胞及两种培养基质中细胞胞外蛋白中硫的XANES光谱 | 第69-71页 |
| ·A.ferrooxidans胞外菌毛蛋白的硫的XANES光谱 | 第71页 |
| ·菌毛蛋白序列的同源比对 | 第71-72页 |
| ·本章小结 | 第72-74页 |
| 第六章 全文结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第87-88页 |
