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拟南芥ICE1通过调节赤霉素合成调控植物生长发育

摘要第1-12页
ABSTRACT第12-15页
1 前言第15-40页
   ·高等植物中赤霉素的研究及分析第15-30页
     ·赤霉素在植物形态发生中的作用第15-23页
     ·赤霉素的生物合成与代谢途径第23-25页
     ·GA 信号转导通路第25-27页
     ·DELLA 蛋白第27-29页
     ·DELLA 蛋白与逆境条件下的生长抑制第29-30页
   ·bHLH 转录因子第30-32页
     ·bHLH 转录因子的特点及研究进展第30-31页
     ·bHLH 转录因子介导的生长发育和环境因子响应第31-32页
   ·GAMYB 转录因子第32-34页
   ·ICE1 介导的低温信号转导第34-38页
     ·CBFs/DREB1s 依赖的低温信号通路第34-35页
     ·ICE1(inducer of CBF expression 1)基因的鉴定第35-36页
     ·ICE1 基因的特征及其基本功能第36-38页
   ·本研究的目的和意义第38-40页
2 材料与方法第40-65页
   ·实验材料第40-41页
     ·植物材料及生长条件第40页
     ·菌株和质粒载体第40页
     ·酶、试剂盒、培养基、杂交膜、各种化学药品及仪器第40-41页
     ·PCR 引物第41页
   ·实验方法第41-65页
     ·植物组织总RNA 的提取第41-42页
     ·反转录cDNA 第一链的合成第42-43页
     ·植物基因组DNA 的提取及纯化第43-44页
     ·PCR 扩增第44页
     ·连接反应第44-45页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第45-46页
     ·碱法小量质粒DNA 的提取第46页
     ·质粒DNA 的酶切鉴定第46-47页
     ·DNA 序列测定第47页
     ·目的片段的回收第47-48页
     ·根癌农杆菌GV3101 感受态细胞的制备与转化第48-49页
     ·表达载体的构建第49-50页
     ·拟南芥的栽培、转化及转基因植株分析第50-52页
     ·实时定量RT-PCR(Real Time quantitative Reverse Transcription PCR)第52-53页
     ·Northern 杂交分析第53-56页
     ·GUS 染色分析第56-57页
     ·扫描电镜观察第57-58页
     ·DAPI 染色第58页
     ·碱性苯胺蓝染色第58-59页
     ·I_2/KI 染色第59页
     ·花粉粒体外萌发实验第59页
     ·微分干涉差显微照相分析第59-61页
     ·染色质免疫共沉淀(CHIP)第61-63页
     ·高效液相色谱(HPLC)测定植物内源激素第63-65页
3 结果与分析第65-94页
   ·ice1-t 突变体的鉴定第65-66页
   ·ice1-t 突变体的低温响应第66-67页
   ·ice1-t 突变体第一片真叶的叶柄变长并且植株变高第67-68页
   ·ice1-t 突变体具有早花的表型第68-69页
   ·内源赤霉素的测定第69-71页
   ·ice1-t 突变体表现出部分雄性不育的表型第71-79页
     ·ice1-t 突变体花的外观形态第71-72页
     ·ice1-t 突变体花粉粒的育性分析第72-75页
     ·ice1-t 突变体花粉粒的扫描电镜观察第75-76页
     ·ice1-t 突变体花粉粒的DAPI 染色分析第76-77页
     ·GAMYB-like 基因在野生型和ice1-t 突变体中的表达分析第77-79页
   ·ice1-t 突变体种子发育异常第79-84页
     ·ice1-t 突变体成熟种子的外观形态第79页
     ·ice1-t 突变体胚的发育过程第79-80页
     ·LECs 基因在野生型和ice1-t 突变体中的表达分析第80-81页
     ·种子萌发实验第81-84页
   ·种子萌发对ABA 的敏感性第84-85页
   ·GA 代谢类基因在野生型和ice1-t 突变体中的表达分析第85-87页
   ·ICE1 蛋白与 AtGA3ox4 基因启动子的特异结合第87-90页
     ·pBIN-ICE1-GFP 融合蛋白表达载体的构建第87-88页
     ·染色质免疫共沉淀(CHIP)第88-90页
   ·ICE1 基因在拟南芥中的遗传转化第90-94页
     ·ICE1 基因的分离及其正义表达载体的构建第91页
     ·转基因植株的鉴定第91-92页
     ·转基因植株的表型分析第92-94页
4 讨论第94-99页
   ·bHLH 转录因子ICE1 影响GA 的生物合成第94-95页
   ·ICE1 对拟南芥株高的影响第95页
   ·ICE1 通过调节GAMYB 基因的表达影响花药发育和开花时间第95-97页
   ·ICE1 通过调节LEC 基因表达影响胚发育第97-98页
   ·ICE1 通过调控GA 合成整合GA 和低温信号通路第98-99页
5 结论第99-100页
参考文献第100-120页
附录第120-130页
致谢第130-131页
攻读学位期间完成的学术论文第131页

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