| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 第一章 人前列腺癌组织中Id1表达及其临床意义 | 第13-33页 |
| 摘要 | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第15-16页 |
| 2 材料和方法 | 第16-21页 |
| ·Realtime PCR法检测人前列腺癌组织标本中Id1mRNA的相对定量 | 第16-19页 |
| ·标本收集 | 第16页 |
| ·药品与试剂 | 第16-17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17页 |
| ·Real time PCR操作方法 | 第17-19页 |
| ·总RNA的提取 | 第17-18页 |
| ·反转录合成cDNA | 第18页 |
| ·Real-Time PCR反应及融解曲线分析 | 第18-19页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳再次鉴定PCR产物特异性 | 第19页 |
| ·mRNA相对定量的计算方法 | 第19页 |
| ·统计学分析 | 第19页 |
| ·免疫荧光法检测人前列腺癌组织标本中Id蛋白的表达 | 第19-21页 |
| ·前列腺癌组织标本收集 | 第19页 |
| ·试剂和材料 | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20页 |
| ·统计学分析 | 第20-21页 |
| 3 结果 | 第21-31页 |
| ·人前列腺癌组织中Id1mRNA检测结果 | 第21-26页 |
| ·前列腺癌组织标本总RNA凝胶电泳结果 | 第21页 |
| ·人前列腺癌组织荧光PCR结果 | 第21-23页 |
| ·Id1mRNA在前列腺组织中的相对定量 | 第23-24页 |
| ·Id1mRNA的表达与前列腺癌临床病理特征的关系 | 第24-26页 |
| ·人前列腺癌组织中Id1蛋白检测结果 | 第26-31页 |
| ·Id1免疫阳性染色结果及其和前列腺癌组织Gleason分级的关系 | 第26-29页 |
| ·Id蛋白表达和相关临床指标的关系 | 第29-31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| 第二章 雄激素及其阻滞剂对前列腺癌细胞表达Id1的影响 | 第33-46页 |
| 摘要 | 第33-34页 |
| 1 前言 | 第34-35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-41页 |
| ·前列腺癌细胞株 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·前列腺癌细胞的培养、接种 | 第36页 |
| ·二氢睾酮(DHT)和氟他胺(FL)作用于前列腺癌细胞 | 第36-37页 |
| ·提取细胞总NRA | 第37页 |
| ·将RNA逆转录为cDNA | 第37页 |
| ·Real time PCR法检测Id1mRNA相对表达量 | 第37-38页 |
| ·WesternBlotting检测Id1蛋白的表达 | 第38-40页 |
| ·统计学分析 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-46页 |
| ·DHT及氟他胺对LNCaP细胞Id1mRNA表达的影响 | 第41-42页 |
| ·DHT及氟他胺对LNCaP细胞Id1蛋白表达的影响 | 第42-43页 |
| ·氟他胺对PC3细胞表达Id1mRNA的影响 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 干涉抑制Id1对前列腺癌PC3细胞的影响 | 第46-68页 |
| 摘要 | 第46-47页 |
| 1 前言 | 第47-48页 |
| 2 材料和方法 | 第48-53页 |
| ·前列腺癌PC3细胞株 | 第48页 |
| ·主要试剂及材料 | 第48-49页 |
| ·细胞培养主要试剂及材料 | 第48页 |
| ·SiRNA实验试剂 | 第48页 |
| ·其它试剂 | 第48-49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·前列腺癌PC3的复苏、培养和接种 | 第49-50页 |
| ·SiRNA-Id1转染PC3细胞 | 第50页 |
| ·Real time-PCR检测小干涉Id1mRNA效果 | 第50页 |
| ·Western Blotting检测小干涉RNA后Id1蛋白的表达 | 第50-51页 |
| ·CCK-8检测PC3细胞的增殖活性 | 第51页 |
| ·PC3细胞凋亡检测 | 第51-52页 |
| ·Annexin V/PI法 | 第51-52页 |
| ·Hoechst染色检测细胞凋亡 | 第52页 |
| ·β-半乳糖苷酶细胞老化染色 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-66页 |
| ·干涉抑制Id1mRNA对雄激素非依赖性PC3细胞的影响 | 第53-59页 |
| ·PC3细胞中干涉抑制Id1基因效果检测 | 第53-54页 |
| ·干涉抑制Id1mRNA对PC3细胞增殖活性的影响 | 第54-56页 |
| ·AnnexinV和PI双染检测干涉抑制Id1mRNA后PC3细胞凋亡率 | 第56-57页 |
| ·Heochest染色检测干涉抑制Id1mRNA后PC3细胞凋亡率 | 第57-58页 |
| ·干涉抑制Id1mRNA后PC3老化细胞率变化 | 第58-59页 |
| ·小干涉Id1mRNA和姜黄素合用对PC3细胞的影响 | 第59-66页 |
| ·小干涉Id1mRNA和姜黄素合用对PC3细胞增殖活性的影响 | 第59-60页 |
| ·小干涉Id1mRNA和姜黄素合用对PC3细胞凋亡的影响 | 第60-63页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡结果 | 第60-61页 |
| ·Heochest染色检测细胞凋亡结果 | 第61-63页 |
| ·小干涉Id1mRNA和姜黄素合用对PC3细胞老化影响 | 第63-64页 |
| ·姜黄素对PC3细胞Id1mRNA表达的影响 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 SiRNA-Id1瘤内直接注射对裸鼠PC3移植瘤的影响 | 第68-81页 |
| 摘要 | 第68-69页 |
| 1 前言 | 第69页 |
| 2 材料和方法 | 第69-74页 |
| ·实验动物及饲养 | 第69页 |
| ·主要试剂 | 第69-70页 |
| ·主要仪器设备 | 第70页 |
| ·建立裸鼠PC3移植瘤模型 | 第70-71页 |
| ·实验分组及干预治疗 | 第71页 |
| ·瘤组织固定、切片、染色 | 第71-72页 |
| ·Real time PCR法检测移植瘤组织中PCNA、MMP9和Id1的mRNA表达 | 第72-74页 |
| ·瘤组织总RNA的提取 | 第72-73页 |
| ·RNA逆转录成cDNA | 第73页 |
| ·Real time PCR法检测Id1mRNA相对表达量 | 第73-74页 |
| ·统计学分析 | 第74页 |
| 3 结果 | 第74-79页 |
| ·裸鼠PC3移植瘤组织结构HE染色鉴定 | 第74页 |
| ·SiRNA-Id1瘤内注射后瘤组织中Id1表达的变化 | 第74-77页 |
| ·瘤内注射SiRNA-Id1后肿瘤体积大小变化 | 第77-78页 |
| ·SiRNA-Id1瘤内注射对瘤组织中PCNA和MMP2的影响 | 第78-79页 |
| 4 讨论 | 第79-81页 |
| 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-87页 |
| 综述 | 第87-106页 |
| 附录(缩略词表) | 第106-108页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
