| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第一部分 siRNA对人乳腺癌MCF-7细胞VEGF基因表达的影响 | 第13-27页 |
| 1.实验材料 | 第13-14页 |
| ·细胞株及培养体系 | 第13页 |
| ·药品与试剂 | 第13页 |
| ·材料与仪器 | 第13-14页 |
| 2.实验方法 | 第14-21页 |
| ·主要溶液的配制 | 第14-15页 |
| ·细胞株培养 | 第15页 |
| ·实验分组及处理 | 第15-16页 |
| ·体外转录合成siRNA | 第16-17页 |
| ·转染方法 | 第17页 |
| ·MTT测细胞增殖 | 第17-18页 |
| ·Hoechst33258核染色 | 第18页 |
| ·RNA提取与RT-PCR | 第18-20页 |
| ·Westblot检测MCF-7细胞VEGF蛋白表达 | 第20-21页 |
| ·统计学处理 | 第21页 |
| 3.结果 | 第21-24页 |
| ·siRNA对肿瘤细胞生长抑制作用 | 第21-23页 |
| ·VEGF mRNA表达的变化 | 第23页 |
| ·VEGFsiRNA对MCF-7细胞靶蛋白表达的影响 | 第23-24页 |
| 4.讨论 | 第24-27页 |
| 第二部分 人树突状细胞的培养和鉴定 | 第27-35页 |
| 1.材料 | 第27-28页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·细胞因子的分装 | 第27-28页 |
| ·实验仪器 | 第28页 |
| 2.方法 | 第28-29页 |
| ·树突状细胞的诱导与培养 | 第28-29页 |
| ·DC鉴定 | 第29页 |
| 3.结果 | 第29-32页 |
| ·DC的形态 | 第29-31页 |
| ·流式细胞仪检测DC表面分子的表达 | 第31-32页 |
| 4.讨论 | 第32-35页 |
| 第三部分 乳腺癌MCF-7细胞培养上清对树突状细胞分化、成熟及功能的影响 | 第35-49页 |
| 1.材料和方法 | 第35-36页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·主要溶液的配制 | 第35-36页 |
| ·主要仪器及耗材 | 第36页 |
| 2.实验方法 | 第36-41页 |
| ·MCF-7细胞培养上清液的收集与不同诱导体系的制备 | 第36-37页 |
| ·外周血来源树突状细胞(PBDC)的体外诱导培养 | 第37页 |
| ·实验分组 | 第37页 |
| ·细胞形态学鉴定 | 第37页 |
| ·FCM法检测Dc特异性表面分子表达 | 第37页 |
| ·MTT法检测单向同种异体混合淋巴细胞反应 | 第37-38页 |
| ·ELISA法检测MLR上清中IFN-γ的分泌水平 | 第38-39页 |
| ·ELIsA法检测Dc培养上清液中IL-12的分泌水平 | 第39-40页 |
| ·负载肿瘤抗原的DC和致敏CTL的制备 | 第40页 |
| ·MTT法检测树突状细胞介导的CTL细胞的肿瘤杀伤效应 | 第40页 |
| ·Hochest 33258荧光染色CTL靶细胞的凋亡 | 第40-41页 |
| ·统计方法 | 第41页 |
| 3.结果 | 第41-46页 |
| ·树突状细胞形态 | 第41页 |
| ·树突状细胞的免疫表型 | 第41-42页 |
| ·树突状细胞致敏的CTL肿瘤杀伤效应 | 第42-44页 |
| ·各组单向同种异体混合淋巴细胞反应水平检测 | 第44-45页 |
| ·不同诱导体系培养DC上清液IL-12水平测定 | 第45页 |
| ·各组MLR上清液中IFN-γ分泌量的测定 | 第45-46页 |
| 4.讨论 | 第46-49页 |
| 第四部分 应用siRNA技术探讨VEGF因子对树突状细胞的影响 | 第49-60页 |
| 1.材料与方法 | 第49-50页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| 2.实验方法 | 第50-52页 |
| ·靶向VEGF基因的siRNA设计合成 | 第50页 |
| ·转染 | 第50页 |
| ·Western blotting检测VEGF蛋白的表达 | 第50页 |
| ·LISA法检测MCF-7乳腺癌细胞培养上清VEGF蛋白水平 | 第50页 |
| ·MCF-7细胞不同诱导体系培养上清液的收集 | 第50页 |
| ·外周血来源树突状细胞(PBDC)的体外诱导培养 | 第50-51页 |
| ·实验分组 | 第51页 |
| ·流式细胞仪检测树突细胞的成熟率 | 第51页 |
| ·负载肿瘤抗原的CTL的制备 | 第51-52页 |
| ·MTT法检测树突细胞介导的CTL的肿瘤杀伤效应 | 第52页 |
| ·ELISA法检测IL-12检测 | 第52页 |
| ·ELISA法检测MLR上清中IFN-γ的分泌水平 | 第52页 |
| ·统计学处理 | 第52页 |
| 3.结果 | 第52-58页 |
| ·培养上清中VEGF蛋白水平 | 第52-53页 |
| ·VEGF siRNA对MCF-7细胞靶蛋白表达的影响 | 第53页 |
| ·树突细胞形态改变 | 第53-54页 |
| ·树突细胞的成熟率 | 第54-55页 |
| ·MTT法检测树突状细胞介导的CTL细胞的肿瘤杀伤效应 | 第55-56页 |
| ·IL-12检测 | 第56-57页 |
| ·各组MLR上清液中IFN-Y分泌量的测定 | 第57-58页 |
| 4.讨论 | 第58-60页 |
| 第五部分 siRNA联合负载肿瘤抗原的树突状细胞对乳腺癌MCF-7细胞的作用研究 | 第60-67页 |
| 1.材料与方法 | 第60-61页 |
| ·试剂 | 第60页 |
| ·主要实验仪器 | 第60-61页 |
| 2.实验方法 | 第61-62页 |
| ·VEGF siRNA设计合成 | 第61页 |
| ·外周血来源树突状细胞(PBDC)的体外诱导培养 | 第61页 |
| ·负载肿瘤抗原的CTL的制备 | 第61页 |
| ·MTT法检测树突细胞介导的CTL的肿瘤杀伤效应 | 第61-62页 |
| ·Hochest 33258荧光染色CTL靶细胞的凋亡 | 第62页 |
| ·统计学处理 | 第62页 |
| 3.结果 | 第62-64页 |
| ·MTT法检测树突状细胞介导的CTL细胞的肿瘤杀伤效应 | 第62-63页 |
| ·CTL肿瘤杀伤效应 | 第63-64页 |
| 4.讨论 | 第64-67页 |
| 结语 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-76页 |
| 综述一 | 第76-87页 |
| 综述二 | 第87-97页 |
| 综述参考文献 | 第97-104页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第104-105页 |
| 附录 | 第105-108页 |
| 致谢 | 第108-110页 |
