| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| ·概述 | 第7页 |
| ·IL2-HSA 融合蛋白简介 | 第7-9页 |
| ·人白介素-2 | 第7-8页 |
| ·IL-2 的生物学作用及临床应用 | 第8页 |
| ·长效多肽药物的研究 | 第8页 |
| ·IL2-HSA 融合蛋白 | 第8-9页 |
| ·蛋白多肽药物的分析方法 | 第9-10页 |
| ·蛋白多肽类药物研究现状 | 第9页 |
| ·蛋白质多肽药物分析方法 | 第9-10页 |
| ·定量分析方法的方法学验证 | 第10页 |
| ·酶联免疫分析方法 | 第10-13页 |
| ·基本原理 | 第11页 |
| ·基本类型 | 第11-12页 |
| ·ELISA 的应用 | 第12-13页 |
| ·立题背景及研究内容 | 第13-15页 |
| ·立题背景和目的 | 第13-14页 |
| ·研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-23页 |
| ·材料 | 第15-17页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第15-16页 |
| ·菌株、细胞株及试验动物 | 第16页 |
| ·融合蛋白表达使用培养基[34] | 第16页 |
| ·融合蛋白活性测定使用培养基 | 第16页 |
| ·缓冲液及试剂配制 | 第16-17页 |
| ·方法 | 第17-23页 |
| ·P. pastoris GS115/pPIH 的发酵培养与诱导表达 | 第17页 |
| ·IL2-HSA 融合蛋白的分离纯化 | 第17页 |
| ·蛋白质样品的SDS-PAGE 分析 | 第17-18页 |
| ·IL2-HSA 融合蛋白的Western blot 鉴定分析 | 第18-19页 |
| ·蛋白质样品的定量分析 | 第19页 |
| ·融合蛋白IL2-HSA 活性分析 | 第19-20页 |
| ·双抗体夹心ELISA 步骤 | 第20页 |
| ·双抗体夹心ELISA 实验条件的选择与优化[53-57] | 第20-21页 |
| ·双抗体夹心ELISA 检测IL2-HSA 融合蛋白标准曲线的制作 | 第21页 |
| ·双抗体夹心ELISA 检测 IL2-HSA 融合蛋白分析方法的考核[58-59] | 第21-22页 |
| ·IL2-HSA 融合蛋白的双抗体夹心ELISA 初步应用 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-41页 |
| ·纯化融合蛋白鉴定与纯度分析 | 第23页 |
| ·纯化融合蛋白细胞活性测定结果 | 第23-26页 |
| ·标准参考品中IL2-HSA 融合蛋白浓度的定量分析 | 第26页 |
| ·双抗体夹心ELISA 反应试验条件的选择与优化 | 第26-33页 |
| ·ELISA 固相载体的选择 | 第26-27页 |
| ·酶标板均一性考察 | 第27-28页 |
| ·包被抗体和酶标抗体的配对实验 | 第28页 |
| ·包被抗体和酶标抗体工作浓度的选择 | 第28页 |
| ·包被缓冲液及其pH 和盐离子浓度对包被效果的影响 | 第28-29页 |
| ·包被温度及时间的选择 | 第29-30页 |
| ·封闭剂的选择与优化 | 第30页 |
| ·洗板条件的选择 | 第30-31页 |
| ·标准曲线的制作 | 第31-33页 |
| ·双抗体夹心ELISA 方法学考核 | 第33-37页 |
| ·灵敏度 | 第33页 |
| ·精密度 | 第33-34页 |
| ·稳定性 | 第34-35页 |
| ·特异性 | 第35页 |
| ·回收率 | 第35-36页 |
| ·健全性分析 | 第36-37页 |
| ·ELISA 检测方法的初步应用 | 第37-41页 |
| ·发酵过程中融合蛋白的检测 | 第37-39页 |
| ·纯化过程中融合蛋白的检测 | 第39页 |
| ·小鼠血清中融合蛋白的检测 | 第39-41页 |
| 结论与展望 | 第41-43页 |
| 主要结论 | 第41页 |
| 展望 | 第41-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第48页 |
