| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| ·L-丝氨酸的性质及其应用 | 第8页 |
| ·L-丝氨酸的生物学性质 | 第8页 |
| ·L-丝氨酸的应用 | 第8页 |
| ·L-丝氨酸的生产概况 | 第8-9页 |
| ·蛋白质水解提取法 | 第8-9页 |
| ·化学合成法 | 第9页 |
| ·酶转化法 | 第9页 |
| ·微生物发酵法 | 第9页 |
| ·直接利用糖质原料发酵产L-丝氨酸的国内外研究进展 | 第9-11页 |
| ·国外研究进展 | 第10页 |
| ·国内研究进展 | 第10-11页 |
| ·叶酸的性质及生物学意义 | 第11页 |
| ·叶酸代谢途径 | 第11页 |
| ·代谢工程 | 第11-12页 |
| ·本课题的立题意义及研究内容 | 第12-14页 |
| ·立题意义 | 第12-13页 |
| ·研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-26页 |
| ·菌株与质粒 | 第14页 |
| ·培养基与培养条件 | 第14-15页 |
| ·培养基 | 第14页 |
| ·培养条件 | 第14-15页 |
| ·主要试剂与工具酶 | 第15-17页 |
| ·生化试剂 | 第15页 |
| ·蛋白质相关试剂 | 第15页 |
| ·工具酶 | 第15页 |
| ·抗生素的配制 | 第15页 |
| ·溶菌酶 | 第15页 |
| ·IPTG 溶液配制 | 第15页 |
| ·SDS-PAGE 电泳试剂的配制 | 第15-16页 |
| ·SDS-PAGE 电泳凝胶的配制 | 第16页 |
| ·镍琼脂糖凝胶 FF 亲和色谱分离缓冲液的配制 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-26页 |
| ·分析方法 | 第17-18页 |
| ·最低抑菌浓度实验 | 第18页 |
| ·胞内叶酸检测 | 第18页 |
| ·代谢通量分析 | 第18-21页 |
| ·谷氨酸棒杆菌的染色体DNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·SYPS-062 及ATCC13032 的pabAB 基因的扩增，及SYPS Anti-pabAB 基因扩增 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第22页 |
| ·基因片段与载体pMD19-T Vector、pET-28a、pJC-tac 的连接 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌重组质粒的抽提 | 第23页 |
| ·重组质粒中插入片段的序列测定及序列比对 | 第23-24页 |
| ·谷氨酸棒杆菌SYPS-062 感受态制备及电转 | 第24页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达 | 第24页 |
| ·重组酶蛋白的纯化 | 第24页 |
| ·重组氨基脱氧分支酸合成酶的酶活测定 | 第24-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-44页 |
| ·外源小分子扰动调控叶酸途径的初步分析 | 第26-33页 |
| ·叶酸途径抑制剂的扰动实验 | 第26-29页 |
| ·叶酸途径中间产物的扰动实验 | 第29-33页 |
| ·磺胺、对氨基苯甲酸扰动后的分析 | 第33-37页 |
| ·磺胺、对氨基苯甲酸扰动后发酵曲线的比较分析 | 第33-34页 |
| ·磺胺、对氨基苯甲酸扰动后代谢通量比较分析 | 第34-37页 |
| ·内源调控叶酸途径的分析结果 | 第37-44页 |
| ·叶酸合成途径关键基因的克隆分析 | 第37-38页 |
| ·SYPS-062 的pabAB 基因胞内表达对其生长及产酸影响 | 第38-40页 |
| ·不同来源的pabAB 片段在大肠杆菌内的诱导表达及酶活性质比较分析 | 第40-44页 |
| 第四章 结论与展望 | 第44-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录1：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51-52页 |
| 附录2：化学计量学方程式 | 第52-53页 |
| 附录3：核苷酸与蛋白质序列 | 第53-55页 |
