| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 中英文对照 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-27页 |
| 1 体细胞核移植 | 第14页 |
| 2 猪体细胞核移植的研究进展 | 第14-16页 |
| 3 影响猪体细胞核移植的几个因素 | 第16-24页 |
| ·供体细胞 | 第16-18页 |
| ·胞质受体 | 第18-20页 |
| ·胚胎重构 | 第20-22页 |
| ·克隆胚的激活 | 第22-23页 |
| ·克隆胚的培养 | 第23-24页 |
| 4 猪胚胎冷冻的研究进展 | 第24-25页 |
| 5 核移植的应用价值 | 第25-26页 |
| 6 存在的问题 | 第26页 |
| 7 本试验研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二部分 试验研究 | 第27-66页 |
| 第一章 供体细胞的准备 | 第27-33页 |
| 1 材料与方法 | 第27-29页 |
| ·试验材料 | 第27页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第27-28页 |
| ·试验试剂 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·溶液配制 | 第28页 |
| ·试验方法 | 第28-29页 |
| ·成纤维细胞组织块培养法 | 第28-29页 |
| ·成纤维细胞传代培养 | 第29页 |
| ·成纤维细胞的纯化 | 第29页 |
| ·成纤维细胞液氮冷冻保存 | 第29页 |
| ·成纤维细胞的解冻复苏 | 第29页 |
| 2 结果 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-33页 |
| ·核移植供体细胞的选择 | 第30-31页 |
| ·成纤维细胞生长特性 | 第31页 |
| ·成纤维细胞培养方法 | 第31页 |
| ·成纤维细胞分离纯化 | 第31页 |
| ·成纤维细胞的冷冻与解冻 | 第31-33页 |
| 第二章 猪卵母细胞体外成熟培养 | 第33-43页 |
| 1 材料与方 | 第33-36页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第33页 |
| ·试验试剂 | 第33-35页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·溶液的配制 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-36页 |
| ·卵丘-卵母细胞复合体（COCs）的回收 | 第35页 |
| ·IVM 的培养 | 第35-36页 |
| ·IVM 后颗粒细胞的去除 | 第36页 |
| ·成熟卵母细胞孤雌激活 | 第36页 |
| ·胚胎培养 | 第36页 |
| ·数据分析 | 第36页 |
| 2 试验结果 | 第36-39页 |
| ·不同培养方式对IVM 的影响 | 第36-37页 |
| ·石蜡油的添加对IVM 培养的影响 | 第37-38页 |
| ·不同外源激素组合对IVM 的影响 | 第38页 |
| ·ITS 对IVM 及孤雌胚体外发育的影响 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-43页 |
| ·不同培养方法对IVM 的影响 | 第40页 |
| ·石蜡油的添加对IVM 的影响 | 第40页 |
| ·外源激素对IVM 的影响 | 第40-41页 |
| ·ITS 对IVM 及孤雌胚体外发育的影响 | 第41-43页 |
| 第三章 猪卵母细胞的孤雌激活及体外胚胎培养 | 第43-51页 |
| 1 材料与方法 | 第43-45页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第43页 |
| ·试剂 | 第43页 |
| ·溶液的配制 | 第43-44页 |
| ·试验方法 | 第44-45页 |
| ·卵母细胞的采集和体外成熟培养 | 第44-45页 |
| ·卵母细胞孤雌激活 | 第45页 |
| ·孤雌胚胎的体外培养 | 第45页 |
| ·数据分析 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-48页 |
| ·Ion 联合6-DMAP 对卵母细胞孤雌激活的影响 | 第45-46页 |
| ·不同电激活参数激活对孤雌胚发育的影响 | 第46-47页 |
| ·激活后不同培养基对孤雌胚体外发育的影响 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-51页 |
| ·Ion 联合6-DMAP 对卵母细胞孤雌激活的影响 | 第48-49页 |
| ·不同电激活参数激活对孤雌胚发育的影响 | 第49页 |
| ·激活后不同培养基对孤雌胚体外发育的影响 | 第49-51页 |
| 第四章 微电极融合法对猪体细胞克隆胚胎融合激活 | 第51-61页 |
| 1 材料与方法 | 第51-56页 |
| ·主要仪器设备 | 第51页 |
| ·主要试剂配制 | 第51-52页 |
| ·微电极的制作与连接 | 第52页 |
| ·试验方法 | 第52-56页 |
| ·供体细胞的准备 | 第52页 |
| ·卵母细胞的体外成熟培养 | 第52页 |
| ·受体卵母细胞去核 | 第52-53页 |
| ·去核后卵母细胞的注核 | 第53-54页 |
| ·重构胚的电融合和激活 | 第54-55页 |
| ·融合率的观察 | 第55页 |
| ·重构胚胎的培养 | 第55页 |
| ·微电极融合激活试验设计 | 第55-56页 |
| ·数据分析 | 第56页 |
| 2 结果 | 第56-59页 |
| ·电场强度对电融合效果的影响 | 第56-57页 |
| ·电脉冲时间对电融合效果的影响 | 第57页 |
| ·电脉冲次数对电融合效果的影响 | 第57页 |
| ·电场强度对电融合效果的影响 | 第57-58页 |
| ·微电极融合法与槽式融合法对电融合效果的影响 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 重构胚的冷冻与解冻 | 第61-65页 |
| 1 材料与方法 | 第61-63页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·主要仪器和耗材 | 第61页 |
| ·OPS 的制备 | 第61-62页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·主要溶液的配制 | 第62-63页 |
| ·供体细胞（成纤维细胞）的培养 | 第62页 |
| ·卵母细胞的体外成熟培养及核移植 | 第62页 |
| ·重构胚的体外培养 | 第62页 |
| ·重构胚的冷冻 | 第62-63页 |
| ·重构胚胎的解冻 | 第63页 |
| ·形态学观察法 | 第63页 |
| 2 结果 | 第63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 全文总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-77页 |
| 致谢 | 第77页 |