| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 第一节 小分子化合物的虚拟筛选(分子对接) | 第9-14页 |
| 1.1 实验所用计算机与软件 | 第10-11页 |
| 1.2 分子对接的小分子化合物 | 第11页 |
| 1.3 对接结果 | 第11-14页 |
| 第二节 基因的克隆、蛋白质的表达与纯化 | 第14-31页 |
| 2.1 常用溶液的配置 | 第16-17页 |
| 2.2 实验步骤 | 第17-28页 |
| 2.2.1 基因的合成 | 第17-20页 |
| 2.2.2 表达载体的构建 | 第20页 |
| 2.2.3 引物的设计 | 第20页 |
| 2.2.4 制备PCR引物工作液 | 第20页 |
| 2.2.5 目的基因PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.2.6 目的基因的提取 | 第21页 |
| 2.2.7 目的基因的酶切 | 第21-22页 |
| 2.2.8 载体质粒pET-26b的酶切 | 第22页 |
| 2.2.9 酶切后KGA目的基因和载体质粒pET-26b的提纯 | 第22页 |
| 2.2.10 目的基因KGA与载体质粒pET-26b的连接 | 第22-23页 |
| 2.2.11 重组质粒的转化 | 第23页 |
| 2.2.12 KGA目的基因与pET-26b重组质粒的检测 | 第23-24页 |
| 2.2.13 重组质粒的转化与蛋白KGA的小量检测 | 第24-27页 |
| 2.2.14 KGA蛋白的大量表达 | 第27页 |
| 2.2.15 KGA蛋白的大量纯化 | 第27-28页 |
| 2.3 实验结果 | 第28-31页 |
| 2.3.1 KGA(pET-26b)蛋白表达小量检测 | 第28-29页 |
| 2.3.2 KGA(pET-26b)蛋白表达亲和层析 | 第29-30页 |
| 2.3.3 KGA(pET-26b)蛋白分子排阻层析的分离纯化 | 第30-31页 |
| 第三节 小分子化合物的体外KGA酶活性抑制试验 | 第31-35页 |
| 3.1 实验原理 | 第32-33页 |
| 3.2 实验步骤 | 第33页 |
| 3.3 实验结果 | 第33-35页 |
| 第四节 毛酸浆内酯对KGA蛋白酶抑制形式的探索 | 第35-37页 |
| 4.1 实验步骤 | 第35-36页 |
| 4.2 实验结果 | 第36-37页 |
| 第五节 毛酸浆内酯与KGA的结合力实验 | 第37-40页 |
| 5.1 微量热泳动原理 | 第37-39页 |
| 5.2 实验步骤 | 第39-40页 |
| 5.3 实验结果 | 第40页 |
| 第六节 毛酸浆内酯的细胞毒性试验 | 第40-44页 |
| 6.1 细胞来源 | 第41-42页 |
| 6.2 实验步骤 | 第42-43页 |
| 6.3 实验结果 | 第43-44页 |
| 讨论 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 综述 | 第50-68页 |
| 参考文献 | 第59-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
