| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| 1.1 地衣素的研究现状及进展 | 第11-15页 |
| 1.1.1 地衣素的结构与性质 | 第11-13页 |
| 1.1.2 地衣素的生物合成与调控机制 | 第13-15页 |
| 1.1.3 地衣素的应用 | 第15页 |
| 1.2 全局性调控蛋白CodY的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.2.1 CodY的结构 | 第16页 |
| 1.2.2 CodY的效应分子 | 第16-17页 |
| 1.2.3 CodY的调控机制 | 第17-19页 |
| 1.3 地衣素的增产策略 | 第19-22页 |
| 1.3.1 地衣素高产菌株的选育 | 第19-20页 |
| 1.3.2 地衣素发酵的氨基酸补料研究 | 第20-21页 |
| 1.3.3 其它策略 | 第21-22页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-29页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第23-24页 |
| 2.1.2 PCR引物 | 第24-27页 |
| 2.1.3 培养基、培养温度和抗生素浓度 | 第27页 |
| 2.1.4 工具酶及试剂 | 第27页 |
| 2.1.5 抽提液和缓冲液 | 第27-28页 |
| 2.1.6 主要实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-39页 |
| 2.2.1 分子水平操作 | 第29-31页 |
| 2.2.2 重组质粒的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.3 地衣芽胞杆菌重组质粒转化 | 第32-33页 |
| 2.2.4 地衣芽胞杆菌基因缺失菌株的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.5 地衣芽胞杆菌基因游离表达菌株的构建 | 第34页 |
| 2.2.6 地衣素摇瓶发酵培养条件 | 第34页 |
| 2.2.7 前体氨基酸添加发酵策略优化实验 | 第34-35页 |
| 2.2.8 胞外胞内前体氨基酸的提取及检测 | 第35-36页 |
| 2.2.9 RNA的提取及反转录PCR | 第36-37页 |
| 2.2.10 实时荧光定量PCR | 第37页 |
| 2.2.11 分析方法 | 第37-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-64页 |
| 3.1 WX02-Psrflch菌株地衣素发酵过程中前体氨基酸的变化规律 | 第39-41页 |
| 3.1.1 地衣芽胞杆菌地衣素发酵过程曲线 | 第39-40页 |
| 3.1.2 胞内胞外游离前体氨基酸的变化 | 第40-41页 |
| 3.2 前体氨基酸的添加对WX02-Psrflch地衣素发酵的影响 | 第41-43页 |
| 3.2.1 前体氨基酸的单一添加对地衣素产量的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.2 前体氨基酸的混合添加对地衣素发酵的影响 | 第42-43页 |
| 3.3 前体氨基酸的添加对codY差异表达工程菌株地衣素发酵的影响 | 第43-54页 |
| 3.3.1 地衣芽胞杆菌codY缺失工程菌的构建 | 第44-46页 |
| 3.3.2 地衣芽胞杆菌WX02-Psrflch的codY基因游离表达菌株的构建 | 第46-51页 |
| 3.3.3 前体氨基酸的添加对codY缺失菌株地衣素发酵的影响 | 第51-53页 |
| 3.3.4 codY的差异表达对地衣芽胞杆菌地衣素发酵水平的影响 | 第53-54页 |
| 3.4 在添加前体氨基酸条件下codY缺失菌株的发酵特性 | 第54-60页 |
| 3.4.1 codY缺失菌株地衣素发酵的过程曲线 | 第54-55页 |
| 3.4.2 codY缺失菌株地衣素发酵过程中溢流代谢产物的变化 | 第55-57页 |
| 3.4.3 codY缺失株地衣素发酵过程中胞外胞内游离前体氨基酸的变化 | 第57-60页 |
| 3.5 codY缺失对地衣素合成相关基因表达的影响 | 第60-64页 |
| 3.5.1 总RNA的提取 | 第60-61页 |
| 3.5.2 codY缺失对地衣素前体氨基酸合成相关基因转录水平的影响 | 第61-62页 |
| 3.5.3 codY缺失对地衣素合成相关调控基因转录水平的影响 | 第62-63页 |
| 3.5.4 codY缺失对主要溢流代谢相关基因转录水平的影响 | 第63-64页 |
| 4 讨论与展望 | 第64-68页 |
| 4.1 讨论 | 第64-66页 |
| 4.2 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 在读期间发表论文 | 第76页 |
