| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-24页 |
| 1 细胞自噬 | 第14-17页 |
| 1.1 自噬体的形成及运输过程 | 第15-16页 |
| 1.2 PAS支架系统 | 第16页 |
| 1.3 Atg8在自噬体形成过程中的作用 | 第16-17页 |
| 1.4 Atg9在自噬过程中的作用 | 第17页 |
| 2 V-ATPase复合体 | 第17-22页 |
| 2.1 V-ATPase的结构特征 | 第18-20页 |
| 2.2 V-ATPase的组装与定位 | 第20-21页 |
| 2.3 V-ATPase活性的调节 | 第21页 |
| 2.4 V-ATPases的功能 | 第21-22页 |
| 3 V-ATPase与细胞自噬的关系 | 第22-23页 |
| 3.1 液泡的酸性与自噬小体的降解 | 第22页 |
| 3.2 V-ATPase的表达与细胞自噬 | 第22-23页 |
| 4 研究目的 | 第23-24页 |
| 第二章 V-ATPase复合体亚基缺失对细胞自噬的影响 | 第24-52页 |
| 1 实验材料 | 第24-25页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第24页 |
| 1.2 培养基及试剂 | 第24页 |
| 1.3 仪器 | 第24-25页 |
| 2 实验方法和技术 | 第25-35页 |
| 2.1 V-ATPase突变体的验证 | 第25-26页 |
| 2.2 GFP-ATG8和RFP-APE1荧光质粒整合 | 第26-27页 |
| 2.3 荧光观察 | 第27页 |
| 2.4 Western Blot检测方法 | 第27-29页 |
| 2.5 基因克隆回补方法 | 第29-33页 |
| 2.6 整合ATG9-3GFP荧光蛋白 | 第33-34页 |
| 2.7 ATG1的敲除方法 | 第34-35页 |
| 2.8 生长表型检测方法 | 第35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-48页 |
| 3.1 V-ATPase复合体单亚基缺失对Atg8的运输及降解和Ape1的运输及成熟的影响 | 第35-39页 |
| 3.2 部分V-ATPase复合体单亚基缺失突变体细胞自噬缺陷的回补验证 | 第39-41页 |
| 3.3 部分V-ATPase复合体亚基双缺失对细胞自噬过程中Atg8和Ape1 的影响 | 第41-44页 |
| 3.4 V-ATPase复合体单亚基缺失对Atg9的运输及定位的影响 | 第44-47页 |
| 3.5 初探V-ATPase亚基缺失影响自噬的原因 | 第47-48页 |
| 4 讨论与小结 | 第48-52页 |
| 4.1 讨论 | 第48-50页 |
| 4.2 小结 | 第50-52页 |
| 第三章 V-ATPase复合体a亚基的两个亚型Vph1和Stv1同时缺失对细胞自噬的影响 | 第52-66页 |
| 1 实验材料 | 第52页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第52页 |
| 1.2 培养基及试剂 | 第52页 |
| 1.3 仪器 | 第52页 |
| 2 实验方法和技术 | 第52-55页 |
| 2.1 STV1的敲除方法 | 第52页 |
| 2.2 荧光观察 | 第52-53页 |
| 2.3 Western Blot检测方法 | 第53页 |
| 2.4 透射电镜(TEM)观察方法 | 第53-54页 |
| 2.5 VPH1和STV1的克隆回补方法 | 第54-55页 |
| 2.6 Vph1和Stv1荧光标记 | 第55页 |
| 2.7 生长情况检测方法 | 第55页 |
| 3 实验结果及分析 | 第55-64页 |
| 3.1 vph1Astv1△双突变体中Atg8的运输及降解和Ape1的运输及成熟情况. | 第56-57页 |
| 3.2 vph1Astv1A双突变体中的自噬小体的堆积情况 | 第57-58页 |
| 3.3 vph1Astv1A双突变体中细胞自噬缺陷的回补验证 | 第58-61页 |
| 3.4 vph1Astv1A双突变体中Atg9的运输及定位情况 | 第61-62页 |
| 3.5 Vph1-GFP及Stv1-GFP的蛋白定位情况 | 第62-63页 |
| 3.6 vph1△stv1△双突变体对不同pH环境的敏感性 | 第63-64页 |
| 4 讨论与小结 | 第64-66页 |
| 4.1 讨论 | 第64-65页 |
| 4.2 小结 | 第65-66页 |
| 全文总结 | 第66-68页 |
| 本论文创新之处 | 第68-70页 |
| 本研究的不足之处及展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 附录 | 第78-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
