| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 1.文献综述 | 第15-25页 |
| 1.1 弓形虫综述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 弓形虫与弓形虫病 | 第15页 |
| 1.1.2 弓形虫生活史 | 第15-16页 |
| 1.1.3 弓形虫病的诊断与治疗 | 第16-17页 |
| 1.2 弓形虫缓殖子的形成 | 第17-19页 |
| 1.2.1 体内弓形虫缓殖子的形成 | 第17-18页 |
| 1.2.2 体外诱导缓殖子转化 | 第18-19页 |
| 1.3 弓形虫缓殖子分化发育的分子机制研究进展 | 第19-25页 |
| 1.3.1 速殖子与缓殖子期差异表达蛋白研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.2 三十四肽重复结构域研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3.3 弓形虫转录调控机制研究进展 | 第22-23页 |
| 1.3.4 弓形虫AP2转录调控因子研究进展 | 第23-25页 |
| 2.研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 3.材料与方法 | 第26-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第26页 |
| 3.1.2 实验菌株、虫株与细胞 | 第26页 |
| 3.1.3 载体与质粒 | 第26页 |
| 3.1.4 引物 | 第26-27页 |
| 3.2 主要仪器与试剂 | 第27-30页 |
| 3.2.1 主要仪器 | 第27-28页 |
| 3.2.2 主要试剂盒 | 第28页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第28页 |
| 3.2.4 主要溶液的配制 | 第28-30页 |
| 3.3 实验方法 | 第30-43页 |
| 3.3.1 弓形虫的体外培养 | 第30-31页 |
| 3.3.2 弓形虫基因组DNA的提取 | 第31页 |
| 3.3.3 弓形虫RNA的提取 | 第31页 |
| 3.3.4 弓形虫cDNA的制备 | 第31-32页 |
| 3.3.5 相关质粒的构建 | 第32-34页 |
| 3.3.6 GST-AP2XI-4重组蛋白的原核表达 | 第34页 |
| 3.3.7 GST融合蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 3.3.8 纯化蛋白的透析与保存 | 第35页 |
| 3.3.9 BCA法测蛋白质浓度 | 第35-36页 |
| 3.3.10 弓形虫细胞核蛋白的提取及鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3.11 弓形虫细胞核蛋白样品Western-blot鉴定 | 第37页 |
| 3.3.12 AP2XI-4蛋白与pLDH2-biotinDNA片段体外结合试验 | 第37-38页 |
| 3.3.13 DnaK-TPR及AP2XII-5敲除株的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| 3.3.14 复制试验 | 第39页 |
| 3.3.15 缓殖子分化试验 | 第39-40页 |
| 3.3.16 弓形虫虫株毒力试验 | 第40页 |
| 3.3.17 ELASE检测小鼠血清 | 第40-41页 |
| 3.3.18 小鼠脑包囊计数 | 第41页 |
| 3.3.19 空斑试验 | 第41-42页 |
| 3.3.20 定量RT-PCR检测敲除株与野生株基因表达差异 | 第42-43页 |
| 4.结果与分析 | 第43-70页 |
| 4.1 DNAK-TPR基因的敲除及功能鉴定 | 第43-49页 |
| 4.1.1 定量RT-PCR验证DnaK-TPR在速殖子及缓殖子期的表达差异 | 第43页 |
| 4.1.2 DnaK-TPR基因的敲除及鉴定 | 第43-45页 |
| 4.1.3 DnaK-TPR敲除株表型试验 | 第45-49页 |
| 4.2 LDH2基因启动子调控元件的确定 | 第49-58页 |
| 4.2.1 LDH2基因启动子全长质粒的构建 | 第49-50页 |
| 4.2.2 LDH2基因启动子截短质粒的构建 | 第50-51页 |
| 4.2.3 鉴定LDH2启动子在缓殖子期特异表达的关键调控区域 | 第51-53页 |
| 4.2.4 确定LDH2启动子序列中的顺式调控元件 | 第53-55页 |
| 4.2.5 AP2XI-4蛋白与LDH2基因启动子的结合 | 第55-58页 |
| 4.3 AP2XII-5转录因子的敲除及功能研究 | 第58-70页 |
| 4.3.1 iTRAQ蛋白组学筛选速殖子与缓殖子核蛋白的差异蛋白 | 第58-60页 |
| 4.3.2 AP2XII-5转录因子的敲除 | 第60-63页 |
| 4.3.3 AP2XII-5转录因子的功能研究 | 第63-66页 |
| 4.3.4 定量RT-PCR检测敲除AP2XII-5一些特异基因mRNA表达水平的变化 | 第66-70页 |
| 5.讨论 | 第70-74页 |
| 5.1 弓形虫DNAK-TPR基因的功能研究 | 第70-71页 |
| 5.2 弓形虫LDH2基因在缓殖子期表达的分子机制 | 第71-72页 |
| 5.3 弓形虫AP2XII-5转录因子的功能研究 | 第72-74页 |
| 6.结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 附录 | 第87-94页 |
