| 缩略语说明 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-39页 |
| 1.1 活性天然产物的重要来源——真菌次级代谢产物 | 第15-20页 |
| 1.2 真菌活性天然产物的发现手段 | 第20-25页 |
| 1.2.1 真菌活性天然产物传统的发现手段 | 第20-21页 |
| 1.2.2 “沉默”基因簇相关天然产物发现策略 | 第21-25页 |
| 1.3 橘青霉次级代谢产物研究现状 | 第25-27页 |
| 1.4 真菌单模块非核糖体多肽合成酶研究进展 | 第27-37页 |
| 1.4.1 真菌天然产物分类 | 第27-28页 |
| 1.4.2 非核糖体肽合成酶 | 第28-31页 |
| 1.4.3 单模块非核糖体多肽合成产物研究 | 第31-35页 |
| 1.4.4 非核糖体肽类化合物的生物信息学分析 | 第35-37页 |
| 1.5 立题依据及主要技术路线 | 第37-39页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第39-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-44页 |
| 2.1.1 菌株 | 第39页 |
| 2.1.2 质粒 | 第39-40页 |
| 2.1.3 所用引物 | 第40页 |
| 2.1.4 本课题主要用到的培养基及其配置方法 | 第40-43页 |
| 2.1.5 抗生素 | 第43页 |
| 2.1.6 实验试剂 | 第43页 |
| 2.1.7 主要仪器 | 第43-44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-53页 |
| 2.2.1 菌种的保藏 | 第44页 |
| 2.2.2 菌株的培养 | 第44-45页 |
| 2.2.3 质粒提取 | 第45页 |
| 2.2.4 基因组提取 | 第45-46页 |
| 2.2.5 全基因组序列的测定及次级代谢产物基因簇分析方法 | 第46-47页 |
| 2.2.6 胶回收 | 第47页 |
| 2.2.7 PCR产物纯化 | 第47页 |
| 2.2.8 酶切和连接 | 第47-48页 |
| 2.2.9 大肠杆菌转化及转化子验证 | 第48页 |
| 2.2.10 酵母菌转化及转化子验证 | 第48页 |
| 2.2.11 RNA的提取、纯化及质量检测 | 第48-50页 |
| 2.2.12 cDNA反转 | 第50页 |
| 2.2.13 RT-qPCR反应 | 第50页 |
| 2.2.14 原生质体转化 | 第50-51页 |
| 2.2.15 大肠感受态的制备 | 第51-52页 |
| 2.2.16 酵母感受态的制备 | 第52页 |
| 2.2.17 化合物的高效液相检测 | 第52页 |
| 2.2.18 化合物的分离与结构鉴定 | 第52-53页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第53-89页 |
| 3.1 橘青霉ATCC38065的全基因组测序及次级代谢基因簇分析 | 第53-70页 |
| 3.1.1 橘青霉ATCC38065的全基因组测序 | 第53-55页 |
| 3.1.2 橘青霉ATCC38065次级代谢产物生物合成基因簇分析 | 第55-70页 |
| 3.2 单模块非核糖体多肽合成酶(ATRR)分析 | 第70-76页 |
| 3.2.1 单模块非核糖体多肽合成酶(ATRR)的发现 | 第70-73页 |
| 3.2.2 单模块非核糖体多肽合成酶(ATRR)A结构域分析 | 第73-75页 |
| 3.2.3 单模块非核糖体多肽合成酶(ATRR)R结构域分析 | 第75-76页 |
| 3.3 橘青霉ATCC38065基于原生质体转化的遗传转化体系的建立 | 第76-79页 |
| 3.3.1 橘青霉ATCC38065抗性测试 | 第76-77页 |
| 3.3.2 不同细胞壁裂解酶制备橘青霉ATCC38065原生质体的效率 | 第77-78页 |
| 3.3.3 不同酶解时间制备橘青霉ATCC38065原生质体的效率 | 第78页 |
| 3.3.4 不同萌发时间制备橘青霉ATCC38065原生质体的效率 | 第78页 |
| 3.3.5 转化菌株的PCR分子鉴定 | 第78-79页 |
| 3.3.6 转化菌株的遗传稳定性分析 | 第79页 |
| 3.4 单模块非核糖体多肽合成酶(ATRR)基因在橘青霉ATCC38065中的过表达研究 | 第79-86页 |
| 3.4.1 橘青霉ATCC38065过表达菌株的构建 | 第80-82页 |
| 3.4.2 橘青霉ATCC38065过表达株各基因表达量验证 | 第82-83页 |
| 3.4.3 P.citrinumOE::atrr产物的分离与鉴定 | 第83-86页 |
| 3.5 橘青霉ATCC38065单模块非核糖体多肽合成酶(ATRR)基因异源表达 | 第86-89页 |
| 3.5.1 异源表达质粒的构建 | 第86-87页 |
| 3.5.2 单模块非核糖体肽合成酶(ATRR)基因的异源表达 | 第87-89页 |
| 第四章 讨论 | 第89-93页 |
| 4.1 橘青霉ATCC38065基因组分析 | 第89-90页 |
| 4.2 橘青霉ATCC38065遗传转化体系的建立 | 第90-91页 |
| 4.3 橘青霉ATCC38065中单模块非核糖体多肽合成酶(ATRR)基因的研究.. | 第91-93页 |
| 第五章 总结 | 第93-95页 |
| 5.1 实验结果小结 | 第93页 |
| 5.2 不足与展望 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-103页 |
| 硕士期间发表论文 | 第103-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
