| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 综述 | 第11-17页 |
| 1.1 肾脏的结构与发育 | 第11-14页 |
| 1.1.1 肾脏的基本结构 | 第11页 |
| 1.1.2 肾脏的发生 | 第11-13页 |
| 1.1.3 肾脏发生的基因调控 | 第13-14页 |
| 1.2 肾脏功能与疾病 | 第14-16页 |
| 1.2.1 肾脏的功能 | 第14页 |
| 1.2.2 肾脏疾病 | 第14-16页 |
| 1.3 斑马鱼的正向遗传筛选 | 第16-17页 |
| 2 引言 | 第17-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-37页 |
| 3.1 实验动物及饲养 | 第19页 |
| 3.2 实验仪器、试剂及耗材 | 第19-28页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第19-20页 |
| 3.2.2 实验用品 | 第20页 |
| 3.2.3 实验试剂配制 | 第20-28页 |
| 3.3 实验方法 | 第28-37页 |
| 3.3.1 斑马鱼基因组DNA的提取 | 第28-29页 |
| 3.3.2 RNA探针的合成与纯化 | 第29-30页 |
| 3.3.3 斑马鱼的正向遗传筛选 | 第30-31页 |
| 3.3.4 实验胚胎的收集与处理 | 第31页 |
| 3.3.5 碱性磷酸酶底物染色(AP staining) | 第31-32页 |
| 3.3.6 斑马鱼全胚胎原位杂交(Whole Mountinsitu Hybridization,WISH) | 第32-33页 |
| 3.3.7 免疫组织化学染色(Immunohistochemistry,IHC) | 第33-34页 |
| 3.3.8 突变体致变基因的图位克隆(Map-based cloning) | 第34-37页 |
| 4 实验结果 | 第37-57页 |
| 4.1 斑马鱼前肾突变体正向遗传筛选 | 第37-40页 |
| 4.1.1 F2代突变家系筛选和突变体传代 | 第37-38页 |
| 4.1.2 F3代突变家系筛选和突变体传代 | 第38页 |
| 4.1.3 F4代突变家系筛选、互补实验、突变体传代 | 第38-39页 |
| 4.1.4 F5代突变家系筛选、互补试验、突变体传代 | 第39-40页 |
| 4.2 F5代家系筛选及相关分析结果分类 | 第40-47页 |
| 4.2.1 F5家系碱性磷酸酶染色(A Pstaining)分类 | 第40-41页 |
| 4.2.2 F5家系全胚胎原位杂交(Whole Mountinsitu Hybridization)分类 | 第41-47页 |
| 4.2.3 F5家系纤毛结构分析 | 第47页 |
| 4.3 肾管与肾小球的关联性 | 第47-48页 |
| 4.4 突变体图位克隆和表型分析 | 第48-57页 |
| 4.4.1 V43定位克隆 | 第49-50页 |
| 4.4.2 V47定位克隆 | 第50-57页 |
| 5 结论 | 第57-59页 |
| 5.1 前肾突变体正向遗传筛选 | 第57页 |
| 5.2 突变体的图为克隆 | 第57-59页 |
| 6 讨论与分析 | 第59-63页 |
| 6.1 技术分析 | 第59-60页 |
| 6.2 结果分析 | 第60-62页 |
| 6.3 筛选的优势和不足 | 第62页 |
| 6.4 基因定位中遇到的问题 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-73页 |
| 附录 | 第73-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
