| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语词汇表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-39页 |
| 1 植物细胞程序性死亡概述 | 第13-24页 |
| 1.1 植物PCD的特征 | 第13-14页 |
| 1.2 植物PCD的生物学意义 | 第14页 |
| 1.3 植物PCD相关细胞器 | 第14-24页 |
| 2 细胞自噬 | 第24-29页 |
| 2.1 ATG基因 | 第24-25页 |
| 2.2 植物细胞自噬的分子机制 | 第25-27页 |
| 2.3 内质网应激与细胞自噬 | 第27-29页 |
| 3 细胞程序性死亡与自噬的交互作用 | 第29-33页 |
| 3.1 细胞程序性死亡和细胞自噬的主要交互作用方式 | 第29-30页 |
| 3.2 细胞程序性死亡和细胞自噬交互作用的重要调节子 | 第30-33页 |
| 4 GAS2 | 第33-36页 |
| 4.1 GAS2的功能研究 | 第33-35页 |
| 4.2 GAS2研究进展 | 第35-36页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第36-39页 |
| 第二章 质谱鉴定蛋白的表达分析及亚细胞定位 | 第39-63页 |
| 引言 | 第39页 |
| 1 材料与方法 | 第39-53页 |
| 1.1 材料 | 第39-40页 |
| 1.2 水稻叶片总RNA提取和cDNA的合成 | 第40-41页 |
| 1.3 P008-OsGAS2、P008-OsGrp94和P008-Os02g0100300表达载体构建 | 第41-47页 |
| 1.4 质粒的大量制备及纯化 | 第47-48页 |
| 1.5 水稻叶鞘原生质体提取与观察 | 第48-49页 |
| 1.6 重组质粒的瞬时转化 | 第49-50页 |
| 1.7 E12353染色和原生质体荧光观察 | 第50页 |
| 1.8 热激处理后,OsGAS2、OsGrp94、Os02g0100300的RT-PCR分析 | 第50-51页 |
| 1.9 DTT处理,低温、盐和干旱胁迫下OsGAS2的荧光定量PCR检测 | 第51-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-61页 |
| 2.1 实验室之前的工作 | 第53-54页 |
| 2.2 OsGAS2和Os02g0100300的生物信息学分析 | 第54-56页 |
| 2.3 水稻悬浮细胞总RNA提取 | 第56页 |
| 2.4 P008-OsGAS2/OsGrp94/Os02g0100300重组载体的构建 | 第56-58页 |
| 2.5 OsGAS2、OsGrp94和Os02g0100300蛋白的亚细胞定位 | 第58-59页 |
| 2.6 热激处理后,OsGAS2、OsGrp94、Os02g0100300的RT-PCR分析 | 第59页 |
| 2.7 DTT处理水稻悬浮细胞后OsbZIP50的荧光定量PCR检测 | 第59-60页 |
| 2.8 DTT处理,低温、高盐和干旱胁迫下OsGAS2的荧光定量PCR检测 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-63页 |
| 第三章 抑制OsGAS2表达促进DTT诱导的水稻悬浮细胞自噬 | 第63-89页 |
| 前言 | 第63页 |
| 1 材料与方法 | 第63-74页 |
| 1.1 材料 | 第63-64页 |
| 1.2 RNAi-OsGAS2干扰载体构建 | 第64-71页 |
| 1.3 农杆菌介导水稻遗传转化 | 第71-72页 |
| 1.4 水稻悬浮细胞系的建立 | 第72-73页 |
| 1.5 转基因水稻悬浮细胞系的检测 | 第73-74页 |
| 2 OsGAS2抑制表达后诱导水稻悬浮细胞发生内质网胁迫 | 第74页 |
| 2.1 DTT处理水稻悬浮细胞 | 第74页 |
| 2.2 水稻悬浮细胞中OsbZIP50的荧光定量检测 | 第74页 |
| 3 OsGAS2抑制表达后诱导水稻悬浮细胞胞质内Ca~(2+)浓度上升及细胞自噬 | 第74-76页 |
| 3.1 水稻悬浮细胞原生质体的提取 | 第74-75页 |
| 3.2 水稻悬浮细胞原生质体的纯化 | 第75页 |
| 3.3 水稻悬浮细胞原生质体自噬模型建立 | 第75页 |
| 3.4 水稻悬浮细胞原生质体胞内Ca~(2+)活性测定 | 第75-76页 |
| 3.5 水稻悬浮细胞原生质体LSDs分析 | 第76页 |
| 3.6 水稻悬浮细胞原生质体电镜观察 | 第76页 |
| 4 结果与分析 | 第76-87页 |
| 4.1 干扰载体LH-FAD2-1390-OsGAS2的构建 | 第76-79页 |
| 4.2 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第79页 |
| 4.3 RNAi-OsGAS2悬浮细胞系的检测 | 第79-81页 |
| 4.4 OsGAS2抑制表达后诱导水稻悬浮细胞发生内质网胁迫 | 第81-82页 |
| 4.5 OsGAS2抑制表达后诱导水稻悬浮细胞胞质内Ca~(2+)浓度上升及细胞自噬 | 第82-87页 |
| 5 讨论 | 第87-89页 |
| 第四章 OsGAS2是Caspase-3新的底物 | 第89-103页 |
| 引言 | 第89页 |
| 1 材料与方法 | 第89-95页 |
| 1.1 材料 | 第89-90页 |
| 1.2 pET 28a-OsGAS2原核表达载体构建 | 第90页 |
| 1.3 6His-OsGAS2融合蛋白的诱导、表达与纯化 | 第90-92页 |
| 1.4 6His- OsGAS2融合蛋白的鉴定 | 第92-94页 |
| 1.5 Caspase-3蛋白酶体外切割6His-OsGAS2融合蛋白 | 第94页 |
| 1.6 Caspase-3蛋白酶切割6His-OsGAS2融合蛋白条件下的western blot分析 | 第94-95页 |
| 2 结果与分析 | 第95-100页 |
| 2.1 重组表达载体pET28a-OsGAS2的构建 | 第95-96页 |
| 2.2 6His-OsGAS2融合蛋白的表达 | 第96页 |
| 2.3 6His-OsGAS2融合蛋白的纯化、质谱鉴定 | 第96-98页 |
| 2.4 Caspase-3蛋白酶体外切割6His-OsGAS2融合蛋白 | 第98-99页 |
| 2.5 Caspase-3体外切割的western blot分析 | 第99-100页 |
| 3 结论 | 第100-103页 |
| 第五章 OsGAS2切割片段激活Caspase-3活性 | 第103-113页 |
| 前言 | 第103页 |
| 1 材料与方法 | 第103-106页 |
| 1.1 材料 | 第103-104页 |
| 1.2 OsGAS2片段P1-P3的亚细胞定位 | 第104页 |
| 1.3 诱导表达载体pTA7002-P1-P5的构建和质粒的大量制备 | 第104-105页 |
| 1.4 水稻叶鞘原生质体提取和重组质粒的瞬时转化 | 第105页 |
| 1.5 OsGAS2切割片段P1-P5瞬时表达的RT-PCR检测 | 第105页 |
| 1.6 OsGAS2切割片段瞬时表达原生质体的LSDs分析 | 第105-106页 |
| 1.7 OsGAS2切割片段瞬时表达原生质体的类caspase-3检测 | 第106页 |
| 2 结果与分析 | 第106-111页 |
| 2.1 OsGAS2切割片段P1-P3的亚细胞定位 | 第106-107页 |
| 2.2 条件表达重组载体的构建 | 第107-109页 |
| 2.3 OsGAS2切割片段在细胞质中条件表达的RT-PCR检测 | 第109-110页 |
| 2.4 OsGAS2切割片段在细胞质中条件表达诱导类caspase-3蛋白酶的活性 | 第110-111页 |
| 3 结论 | 第111-113页 |
| 全文结论 | 第113-115页 |
| 创新之处 | 第115-117页 |
| 存在问题与展望 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-133页 |
| 附录 | 第133-137页 |
| 攻读博士学位期间发表与投递的论文 | 第137-139页 |
| 致谢 | 第139页 |
