| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 趋化因子及其受体 | 第12-16页 |
| 1.1 趋化因子 | 第12-13页 |
| 1.2 趋化因子受体概述 | 第13-14页 |
| 1.2.1 分类简介 | 第13页 |
| 1.2.2 信号通路简介 | 第13-14页 |
| 1.3 趋化因子相关疾病概述 | 第14-15页 |
| 1.3.1 趋化因子与炎症 | 第14页 |
| 1.3.2 趋化因子与病毒病 | 第14-15页 |
| 1.4 趋化因子拮抗剂的研究 | 第15-16页 |
| 2 RANTES概述 | 第16-18页 |
| 2.1 分子结构 | 第16-17页 |
| 2.2 主要功能 | 第17-18页 |
| 3 CCR1/CCR5受体概述 | 第18-21页 |
| 3.1 分子结构 | 第18-20页 |
| 3.2 生物功能 | 第20-21页 |
| 4 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 猪CCR1、CCR5真核表达载体的构建及信号通路分析 | 第22-39页 |
| 1 试验材料 | 第22-24页 |
| 1.1 主要试剂 | 第22-23页 |
| 1.2 试验仪器 | 第23页 |
| 1.3 主要溶液的配置 | 第23-24页 |
| 2 试验方法 | 第24-29页 |
| 2.1 引物设计 | 第24页 |
| 2.2 克隆猪CCR1、CCR5基因 | 第24-25页 |
| 2.3 pcDNA3.1(+)与CCR5、CCR1的连接 | 第25页 |
| 2.4 pcDNA3.1(+)-CCR1和pcDNA3.1(+)-CCR5的转化与小提 | 第25-26页 |
| 2.5 pcDNA3.1(+)-CCR5和pcDNA3.1(+)-CCR1载体的鉴定 | 第26-28页 |
| 2.5.1 酶切鉴定 | 第26页 |
| 2.5.2 基因测序鉴定 | 第26-27页 |
| 2.5.4 RT-PCR鉴定 | 第27页 |
| 2.5.5 Western Blotting鉴定 | 第27-28页 |
| 2.6 CCR1/5与CRE或SRE间的信号关系 | 第28页 |
| 2.7 数据处理 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-35页 |
| 3.1 CCR1和CCR5基因的PCR扩增结果 | 第29页 |
| 3.2 pcDNA3.1(+)-CCR1和pcDNA3.1(+)-CCR5双酶切的鉴定结果 | 第29-31页 |
| 3.3 基因测序结果 | 第31-32页 |
| 3.4 RT-PCR结果 | 第32-33页 |
| 3.5 Western Blotting鉴定结果 | 第33页 |
| 3.6 CCR1/5与CRE或SRE间的信号关系 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| 4.1 猪CCR1和CCR5基因的基因克隆 | 第35页 |
| 4.2 基因载体的选择 | 第35页 |
| 4.3 基因载体的鉴定 | 第35-36页 |
| 4.4 环磷酸腺苷反应元件(CRE)和血清反应元件(SRE) | 第36-38页 |
| 5 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 建立CCR1和CCR5细胞模型并优化筛选条件 | 第39-53页 |
| 1 材料 | 第39-41页 |
| 1.1 主要仪器 | 第39页 |
| 1.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第40页 |
| 1.4 CHO-K1细胞培养 | 第40-41页 |
| 1.4.1 复苏 | 第40页 |
| 1.4.2 传代 | 第40页 |
| 1.4.3 冻存 | 第40-41页 |
| 1.5 CHO-K1铺96孔细胞板 | 第41页 |
| 1.6 细胞裂解及荧光检测 | 第41页 |
| 1.6.1 裂解细胞 | 第41页 |
| 1.6.2 荧光检测器检测 | 第41页 |
| 2 试验过程 | 第41-45页 |
| 2.1 CCR1和CCR5转染CHO-K1 | 第41-42页 |
| 2.1.1 细胞的准备 | 第41-42页 |
| 2.1.2 目的基因质粒的转染 | 第42页 |
| 2.2 细胞抗性筛选 | 第42页 |
| 2.3 稳定转染细胞的单克隆 | 第42-43页 |
| 2.4 模型的筛选条件优化 | 第43-44页 |
| 2.4.1 CCR1/CRE-CHO-K1的Forskolin作用时间和浓度 | 第43页 |
| 2.4.2 药物作用浓度 | 第43-44页 |
| 2.4.3 药物作用时间 | 第44页 |
| 2.4.4 DMSO浓度 | 第44页 |
| 2.5 模型评价 | 第44-45页 |
| 2.5.1 数据采集 | 第44-45页 |
| 2.5.2 模型数据分析 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-50页 |
| 3.1 CCR1/CRE-CHO-K1的Forskolin优化结果 | 第45-47页 |
| 3.2 药物浓度优化结果 | 第47-48页 |
| 3.3 药物作用时间优化结果 | 第48-49页 |
| 3.4 DMSO浓度优化结果 | 第49-50页 |
| 3.5 模型评价结果 | 第50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 4.1 高通量筛选模型 | 第50-51页 |
| 4.2 以CCR1和CCR5为靶点治疗疾病的可能性 | 第51页 |
| 5 小结 | 第51-53页 |
| 全文结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 在读期间发表的文章 | 第61-62页 |
