| 中文摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-21页 |
| 1 热休克蛋白的分类 | 第10页 |
| 2 HsP90的结构及功能 | 第10-13页 |
| 2.1 Hsp90的结构和构象动态变化 | 第10-12页 |
| 2.2 Hsp90的主要功能 | 第12-13页 |
| 2.2.1 分子伴侣 | 第12页 |
| 2.2.2 参与免疫应答 | 第12-13页 |
| 2.2.3 增加耐热能力 | 第13页 |
| 3 HsP90的表达调控 | 第13页 |
| 4 HsP90参与细胞凋亡 | 第13-14页 |
| 5 与HsP90作用的蛋白 | 第14页 |
| 6 HsP90的应用前景 | 第14-15页 |
| 7 研究目的和意义 | 第15-16页 |
| 参考文献 | 第16-21页 |
| 研究一 Hsp90基因在牙鲆组织的表达分布 | 第21-28页 |
| 1 材料与方法 | 第21-25页 |
| 1.1 试剂 | 第21页 |
| 1.2 主要仪器 | 第21页 |
| 1.3 牙鲆及实验处理 | 第21-22页 |
| 1.4 引物设计 | 第22页 |
| 1.5 牙鲆组织总RNA提取和cDNA的合成 | 第22-23页 |
| 1.6 Real-Time PCR分析 | 第23-25页 |
| 2 结果 | 第25-27页 |
| 2.1 Hsp90基因mRNA在牙鲆中的表达分布 | 第25-27页 |
| 3 讨论 | 第27-28页 |
| 研究二 温度和鳗弧菌感染对牙鲆Hsp90基因表达的影响 | 第28-36页 |
| 1 材料与方法 | 第28-30页 |
| 1.1 试剂 | 第28页 |
| 1.2 主要仪器 | 第28页 |
| 1.3 温度处理及牙鲆组织采集 | 第28页 |
| 1.4 鳗弧菌感染及样品采集 | 第28-29页 |
| 1.5 引物设计 | 第29页 |
| 1.6 牙鲆组织总RNA提取和cDNA的合成 | 第29页 |
| 1.7 Real-Time PCR分析 | 第29-30页 |
| 2 结果 | 第30-35页 |
| 2.1 不同温度刺激1h对牙鲆Hsp90基因mRNA的表达 | 第30页 |
| 2.2 不同处理时间对牙鲆Hsp90基因mRNA的表达 | 第30-33页 |
| 2.3 牙鲆感染鳗弧菌后Hsp90基因的表达 | 第33-35页 |
| 3 讨论 | 第35-36页 |
| 研究三 牙鲆Hsp90a的原核表达 | 第36-47页 |
| 1 材料与方法 | 第36-42页 |
| 1.1 主要试剂和仪器 | 第36页 |
| 1.2 引物设计和合成 | 第36页 |
| 1.3 总RNA提取和RT-PCR | 第36-37页 |
| 1.4 PCR扩增 | 第37页 |
| 1.5 pBAD/gⅢA-Hsp90a重组载体构建 | 第37-39页 |
| 1.5.1 PCR产物的回收纯化 | 第37页 |
| 1.5.2 Hsp90a基因与pEASY-T1的连接、转化 | 第37-38页 |
| 1.5.3 重组质粒pEASY-T1-Hsp90a提取和酶切鉴定 | 第38页 |
| 1.5.4 Hsp90a基因与表达载体pBAD/gⅢA双酶切 | 第38页 |
| 1.5.5 Hsp90a基因与表达载体pBAD/gⅢA连接、转化 | 第38页 |
| 1.5.6 重组质粒pBAD/gⅢA-Hsp90a提取和酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 1.6 重组载体pBAD/gⅢA-Hsp90a的诱导表达 | 第39页 |
| 1.7 表达产物的SDS-PAGE检测及可溶性分析 | 第39页 |
| 1.8 重组蛋白的大量诱导表达及表达后的处理 | 第39-41页 |
| 1.8.1 重组蛋白的大量诱导表达和纯化 | 第39-40页 |
| 1.8.2 纯化后蛋白的复性和浓缩 | 第40页 |
| 1.8.3 BCA法测定纯化蛋白浓度 | 第40-41页 |
| 1.9 重组蛋白Western Blot检测 | 第41-42页 |
| 2 结果 | 第42-46页 |
| 2.1 Hsp90a基因扩增 | 第42页 |
| 2.2 重组质粒pEASY-T1-Hsp90α的鉴定 | 第42-43页 |
| 2.3 重组质粒pBAD/gⅢA-Hsp90α的鉴定 | 第43页 |
| 2.4 Hsp90原核表达和SDS-PAGE检测结果 | 第43-44页 |
| 2.5 目的蛋白测定浓度 | 第44-45页 |
| 2.6 重组蛋白Western Blot检测 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 后续研究 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第53-54页 |
