| 内容提要 | 第1-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-16页 |
| ·HCV 的概况 | 第9-11页 |
| ·HCV 的危害 | 第9页 |
| ·HCV 的结构特点 | 第9-10页 |
| ·HCV NS3 丝氨酸蛋白酶的特点 | 第10-11页 |
| ·抗HCV 治疗的现状 | 第11页 |
| ·筛选NS3 丝氨酸蛋白酶抑制剂的现状 | 第11-12页 |
| ·筛选NS3 丝氨酸蛋白酶抑制剂的方法 | 第11-12页 |
| ·筛选NS3 丝氨酸蛋白酶抑制剂的细胞模型 | 第12页 |
| ·报告基因的选择 | 第12-14页 |
| ·GFP 的结构特点 | 第12-13页 |
| ·GFP 的特殊位点 | 第13-14页 |
| ·报告基因的要求 | 第14页 |
| ·本课题的实验目的、意义和研究策略 | 第14-16页 |
| ·实验目的和意义 | 第14页 |
| ·研究策略 | 第14-15页 |
| ·技术路线 | 第15-16页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第16-27页 |
| ·实验材料 | 第16-18页 |
| ·菌种和载体 | 第16页 |
| ·细胞系和细胞培养基 | 第16页 |
| ·工具酶，试剂（盒） | 第16页 |
| ·试剂的配制 | 第16-18页 |
| ·实验仪器 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-27页 |
| ·提取质粒DNA | 第19-20页 |
| ·质粒载体的双酶切处理 | 第20页 |
| ·切胶回收DNA | 第20-21页 |
| ·普通PCR 反应体系和条件 | 第21页 |
| ·重叠PCR 反应体系和条件 | 第21-22页 |
| ·DNA 片段的双酶切处理 | 第22页 |
| ·纯化PCR 产物及酶切产物 | 第22-23页 |
| ·连接反应 | 第23页 |
| ·质粒DNA 转化感受态细胞 | 第23页 |
| ·菌落PCR 鉴定阳性克隆 | 第23-24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·共转化的实现 | 第24页 |
| ·蛋白质的诱导表达 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第24-25页 |
| ·制片观察 | 第25-26页 |
| ·细胞计数 | 第26页 |
| ·转染观察 | 第26-27页 |
| 第3章 原核系统中报告质粒的确定 | 第27-43页 |
| ·stGFP156-5AB 部分 | 第27-33页 |
| ·实验材料 | 第27页 |
| ·方法和结果 | 第27-32页 |
| ·分析和讨论 | 第32-33页 |
| ·stGFP172-5AB 部分 | 第33-37页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·方法和结果 | 第33-37页 |
| ·分析和讨论 | 第37页 |
| ·EGFP172-5AB 部分 | 第37-42页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·方法和结果 | 第37-42页 |
| ·分析和讨论 | 第42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第4章 原核系统中NS3 丝氨酸蛋白酶的活性检测 | 第43-49页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·菌种和载体 | 第43页 |
| ·工具酶，试剂（盒） | 第43页 |
| ·方法和结果 | 第43-48页 |
| ·重组质粒pET-22b-NS3/4A 的构建 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pET-28a-EGFP 的构建 | 第44-45页 |
| ·制备感受态细胞，实现共转化 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第46-47页 |
| ·制片观察荧光现象结果 | 第47-48页 |
| ·分析和讨论 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第5章 真核系统中报告质粒的构建 | 第49-54页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·菌种和载体 | 第50页 |
| ·细胞系和细胞培养基 | 第50页 |
| ·方法和结果 | 第50-53页 |
| ·pcDNA3.1(+)质粒载体的双酶切处理 | 第50页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1-E172_(5AB)的构建 | 第50-51页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1-E172N-2A-E172C 的构建 | 第51-52页 |
| ·转染后观察绿色荧光现象 | 第52-53页 |
| ·分析和讨论 | 第53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第6章 真核系统中NS3 丝氨酸蛋白酶的活性检测 | 第54-59页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·菌种和载体 | 第54页 |
| ·细胞系和细胞培养基 | 第54页 |
| ·方法和结果 | 第54-58页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1-E172_(5AB)-2A-NS3/4A 表达质粒的构建 | 第54-56页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1-EGFP-2A-NS3/4A 表达质粒的构建 | 第56-57页 |
| ·转染后观察绿色荧光现象 | 第57-58页 |
| ·分析和讨论 | 第58页 |
| ·小结 | 第58-59页 |
| 第7章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 中文摘要 | 第69-71页 |
| Abstract | 第71-73页 |
