| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 文献综述 | 第12-21页 |
| 第一章 microRNA 的形成及作用机制 | 第12-14页 |
| 1.1 microRNA 的发现和形成 | 第12-13页 |
| 1.2 microRNA 的作用机制 | 第13-14页 |
| 第二章 肌肉发育的研究进展 | 第14-17页 |
| 2.1 骨骼肌的发育 | 第14页 |
| 2.2 骨骼肌结构的组成 | 第14-15页 |
| 2.3 骨骼肌发育的调节 | 第15-17页 |
| 第三章 miRNAs 在肌肉中的研究进展 | 第17-21页 |
| 3.1 miRNA 在成肌细胞增殖过程中的作用 | 第17页 |
| 3.2 miRNAs 在成肌细胞分化过程中的功能 | 第17-18页 |
| 3.3 miRNAs 调控肌纤维类型 | 第18页 |
| 3.4 miRNAs 与肌肉疾病 | 第18-20页 |
| 3.5 展望 | 第20-21页 |
| 试验研究 | 第21-55页 |
| 第四章 试验假设与方案 | 第21-22页 |
| 4.1 试验假设 | 第21页 |
| 4.2 试验方案 | 第21-22页 |
| 第五章 miR-151-3p 调控肌肉的发育 | 第22-30页 |
| 5.1 试验材料和方法 | 第22-27页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第22页 |
| 5.1.2 试验方法 | 第22-27页 |
| 5.2 结果 | 第27-29页 |
| 5.2.1 miR-151-3p 对小鼠成肌细胞系 C2C12 分化的影响 | 第27-28页 |
| 5.2.2 miR-151-3p 影响肌纤维类型 | 第28-29页 |
| 5.3 讨论 | 第29页 |
| 5.4 小结 | 第29-30页 |
| 第六章 miR-151-3p 的靶基因分析与鉴定 | 第30-42页 |
| 6.1 试验材料和方法 | 第30-34页 |
| 6.1.1 试验材料 | 第30页 |
| 6.1.2 实验方法 | 第30-34页 |
| 6.1.3 双荧光素酶报告基因活性检测 | 第34页 |
| 6.1.4 Western Blot 检测蛋白 | 第34页 |
| 6.2 实验结果 | 第34-40页 |
| 6.2.1 生物信息学分析结果 | 第34-35页 |
| 6.2.2 T-ATP2a2-3′UTR 的构建 | 第35-36页 |
| 6.2.3 T-ATP2a2-mUTR 的构建 | 第36-37页 |
| 6.2.4 双荧光素酶报告载体的构建 | 第37-38页 |
| 6.2.5 双荧光素酶报告系统验证 miR-151-3p 靶基因 | 第38-39页 |
| 6.2.6 RNA 水平及蛋白水平验证 miR-151-3p 对 ATP2a2 的影响 | 第39-40页 |
| 6.3 讨论 | 第40-41页 |
| 6.4 小结 | 第41-42页 |
| 第七章 miR-151 腺病毒载体的构建和病毒的获得 | 第42-48页 |
| 7.1 实验材料与方法 | 第42-43页 |
| 7.1.1 实验材料 | 第42页 |
| 7.1.2 实验方法 | 第42-43页 |
| 7.2 结果 | 第43-47页 |
| 7.2.1 小鼠 T-pri-miR-151 载体的构建 | 第43-44页 |
| 7.2.2 重组腺病毒表达载体的构建 | 第44-46页 |
| 7.2.3 重组腺病毒的包装、扩繁及滴度测定 | 第46-47页 |
| 7.3 讨论与小结 | 第47-48页 |
| 第八章 过表达 miR-151-3p 对细胞系和原代细胞的影响及机理 | 第48-55页 |
| 8.1 材料与方法 | 第48页 |
| 8.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 8.1.2 实验方法 | 第48页 |
| 8.2 结果 | 第48-53页 |
| 8.2.1 AdV-miR-151 侵染细胞后对肌纤维类型的影响 | 第48-52页 |
| 8.2.2 干扰 ATP2a2 后对肌纤维类型的影响 | 第52-53页 |
| 8.3 讨论 | 第53-54页 |
| 8.4 小结 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 创新点 | 第56-57页 |
| 进一步研究内容 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 附录 | 第62-77页 |
| 附录 1 主要试剂及配方 | 第62-64页 |
| 附录 2 实验仪器 | 第64-65页 |
| 附录 3 琼脂糖凝胶纯化回收 | 第65-66页 |
| 附录 4 转化涂板 | 第66-67页 |
| 附录 5 质粒小量提取 | 第67-68页 |
| 附录 6 双荧光素酶报告载体 | 第68-69页 |
| 附录 7 细胞总蛋白提取 | 第69-70页 |
| 附录 8 WB 分析 | 第70-71页 |
| 附录 9 乙醇沉淀回收 | 第71-72页 |
| 附录 10 BJ5183 感受态的制备 | 第72-73页 |
| 附录 11 线性化 pAdTrack-miR-151 与 pAdEasy-1 同源重组 | 第73-74页 |
| 附录 12 AdV-miR-151 的扩繁和病毒滴度测定 | 第74-75页 |
| 附录 13 小鼠原代细胞的提取 | 第75-76页 |
| 附录 14 统计分析 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |
