| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 产气荚膜梭菌的生物学特点 | 第11-12页 |
| 1.1.1 产气荚膜梭菌菌体形态特征 | 第11页 |
| 1.1.2 产气荚膜梭菌菌体培养特征 | 第11-12页 |
| 1.1.3 产气荚膜梭菌菌体的生化特征及抵抗力 | 第12页 |
| 1.2 C 型产气荚膜梭菌的毒力因子 | 第12-16页 |
| 1.2.1 α毒素（CPA） | 第13-14页 |
| 1.2.2 β1 毒素（CPB1） | 第14-16页 |
| 1.2.3 β2 毒素（CPB2）和β2 毒素编码基因（cpb2） | 第16页 |
| 1.3 C 型产气荚膜梭菌的致病机理 | 第16-20页 |
| 1.3.1 α毒素（CPA）的致病机理 | 第17-18页 |
| 1.3.2 β1 毒素（CPB1）的致病机理和作用部位 | 第18-20页 |
| 1.4 IgY 技术在畜禽胃肠道疾病中的应用 | 第20-22页 |
| 1.4.1 IgY 用于防治幼畜细菌性和病毒性腹泻 | 第21-22页 |
| 1.4.2 IgY 用于防治禽细菌性和病毒性疾病 | 第22页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 C 型产气荚膜梭菌α毒素蛋白原核表达和纯化 | 第23-39页 |
| 2.1 材料 | 第23-27页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第23页 |
| 2.1.2 工具酶和试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.4 所用溶液及培养基的配制 | 第24-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-32页 |
| 2.2.1 C 型产气荚膜梭菌基因组的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.2 引物设计与合成 | 第28页 |
| 2.2.3 α毒素基因的 PCR 扩增 | 第28页 |
| 2.2.4 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| 2.2.5 重组 T-Vector pMD19-α的克隆 | 第28-29页 |
| 2.2.6 重组 T-Vector pMD19-α的鉴定 | 第29页 |
| 2.2.7 重组表达质粒 pET-32a-α的构建与鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.8 pET-32a-α的 BL 21（DE3）表达菌的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.9 表达蛋白的 Western blot 分析 | 第31页 |
| 2.2.10 包涵体蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.11 包涵体蛋白的复性 | 第32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-37页 |
| 2.3.1 C 型产气荚膜梭菌α毒素基因的 PCR 扩增 | 第32页 |
| 2.3.2 T-Vector pMD19-α的酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.3 重组表达质粒 pET-32a-α的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.4 α毒素蛋白最佳诱导时间的确定 | 第34页 |
| 2.3.5 α毒素蛋白 IPTG 诱导浓度的确定 | 第34-35页 |
| 2.3.6 α毒素蛋白的 Western blot 分析 | 第35页 |
| 2.3.7 α毒素重组蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| 2.3.8 α毒素重组蛋白的复性 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 抗 C 型产气荚膜梭菌α毒素重组蛋白特异性 IgY 抗体的制备 | 第39-45页 |
| 3.1 材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 试剂 | 第39页 |
| 3.1.2 溶液配制 | 第39-40页 |
| 3.2 方法 | 第40-41页 |
| 3.2.1 免疫原制备及免疫 | 第40页 |
| 3.2.2 IgY 抗体提取和鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.3 间接 ELISA 检测 IgY 抗体效价 | 第41页 |
| 3.2.4 IgY 抗体的 Western blot 鉴定 | 第41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-43页 |
| 3.3.1 IgY 抗体的 SDS-PAGE 电泳 | 第41-42页 |
| 3.3.2 抗体效价动态变化 | 第42页 |
| 3.3.3 Western blot 鉴定 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-44页 |
| 3.5 小结 | 第44-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |
