| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 符号说明 | 第10-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-27页 |
| 1 五种猪繁殖障碍性疫病及其病原学特征 | 第16-21页 |
| 1.1 猪瘟概述 | 第16-17页 |
| 1.1.1 猪瘟病毒病原学特征 | 第16页 |
| 1.1.2 猪瘟病毒E0基因的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2 猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第17-18页 |
| 1.2.1 猪繁殖与呼吸综合征病毒病原学特征 | 第17页 |
| 1.2.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3 猪流行性乙型脑炎概述 | 第18-19页 |
| 1.3.1 猪流行性乙型脑炎病毒病原学特征 | 第18页 |
| 1.3.2 猪流行性乙型脑炎病毒PrM/M基因的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 猪圆环病毒病概述 | 第19-20页 |
| 1.4.1 猪圆环病毒病病原学特征 | 第19页 |
| 1.4.2 猪圆环病毒ORF2基因的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.5 猪伪狂犬病概述 | 第20-21页 |
| 1.5.1 猪伪狂犬病病毒病原学特征 | 第20-21页 |
| 1.5.2 猪伪狂犬病病毒gB基因的研究进展 | 第21页 |
| 2 猪繁殖障碍性疫病诊断方法的研究进展 | 第21-24页 |
| 2.1 病毒的分离鉴定 | 第21页 |
| 2.2 血清学诊断方法 | 第21-23页 |
| 2.2.1 血凝试验(HA)及血凝抑制试验(HI) | 第21-22页 |
| 2.2.2 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第22页 |
| 2.2.3 免疫荧光技术(IFT) | 第22页 |
| 2.2.4 病毒中和试验(VNT) | 第22-23页 |
| 2.3 分子生物学诊断方法 | 第23-24页 |
| 2.3.1 聚合酶链式反应(PCR) | 第23页 |
| 2.3.2 环介导等温扩增技术(LAMP) | 第23页 |
| 2.3.3 基因芯片检测技术(Microarray) | 第23-24页 |
| 3 金标银染可视化技术及其研究进展 | 第24-26页 |
| 3.1 金标银染可视化芯片技术概述 | 第24页 |
| 3.2 金标银染可视化芯片技术的研究进展 | 第24-26页 |
| 3.2.1 金标银染可视化cDNA芯片的研究进展 | 第24-25页 |
| 3.2.2 金标银染可视化寡核苷酸芯片的研究进展 | 第25页 |
| 3.2.3 金标银染可视化蛋白芯片的研究进展 | 第25-26页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 第二章 可视化共检基因芯片的制备与条件优化研究 | 第27-45页 |
| 1 材料 | 第27-28页 |
| 1.1 生物材料 | 第27页 |
| 1.2 主要仪器 | 第27页 |
| 1.3 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-35页 |
| 2.1 靶基因引物和寡核苷酸探针的制备 | 第28-30页 |
| 2.1.1 靶基因引物的设计与合成 | 第28-29页 |
| 2.1.2 寡核苷酸探针的设计 | 第29-30页 |
| 2.2 靶基因重组质粒菌的复苏与鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.1 靶基因重组质粒菌的复苏 | 第30页 |
| 2.2.2 靶基因重组质粒的验证 | 第30-31页 |
| 2.3 可视化基因芯片的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.1 可视化基因芯片阵列设计 | 第31页 |
| 2.3.2 可视化基因芯片的喷制 | 第31-32页 |
| 2.3.3 可视化基因芯片探针的固定和封闭 | 第32页 |
| 2.4 靶基因不对称PCR扩增条件优化 | 第32-33页 |
| 2.5 可视化基因芯片的检测步骤 | 第33-34页 |
| 2.5.1 杂交 | 第33页 |
| 2.5.2 Nanogold-Streptavidin的孵育 | 第33页 |
| 2.5.3 显色 | 第33-34页 |
| 2.5.4 结果的判定与信号扫描 | 第34页 |
| 2.6 可视化基因芯片的条件优化研究 | 第34-35页 |
| 2.6.1 可视化基因芯片喷样次数的优化 | 第34页 |
| 2.6.2 可视化基因芯片杂交温度的优化 | 第34页 |
| 2.6.3 可视化基因芯片杂交时间的优化 | 第34页 |
| 2.6.4 可视化基因芯片Nanogold-Streptavidin的优化 | 第34页 |
| 2.6.5 可视化基因芯片银染时间的优化 | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35-42页 |
| 3.1 靶基因重组质粒菌复苏鉴定结果 | 第35-36页 |
| 3.2 不对称PCR扩增优化结果 | 第36-38页 |
| 3.3 喷样次数优化结果 | 第38页 |
| 3.4 杂交温度优化结果 | 第38-39页 |
| 3.5 杂交时间优化结果 | 第39-41页 |
| 3.6 纳米金溶液浓度优化结果 | 第41页 |
| 3.7 银染时间优化结果 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| 4.1 靶基因的选择 | 第42-43页 |
| 4.2 寡核苷酸探针 | 第43页 |
| 4.3 可视化基因芯片的制备 | 第43页 |
| 4.4 可视化基因芯片的杂交 | 第43-44页 |
| 4.5 可视化基因芯片的显色 | 第44-45页 |
| 第三章 可视化共检基因芯片检测技术的质量评价 | 第45-52页 |
| 1 材料 | 第45页 |
| 1.1 生物材料 | 第45页 |
| 1.2 主要试剂 | 第45页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第45页 |
| 2 方法 | 第45-47页 |
| 2.1 可视化共检基因芯片制备 | 第45页 |
| 2.2 靶基因的扩增标记 | 第45-46页 |
| 2.3 可视化基因芯片的特异性试验 | 第46页 |
| 2.4 可视化基因芯片的敏感性试验 | 第46-47页 |
| 2.5 可视化基因芯片的稳定性试验 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-49页 |
| 3.1 可视化基因芯片的特异性试验结果 | 第47-48页 |
| 3.2 可视化基因芯片的敏感性试验结果 | 第48-49页 |
| 3.3 可视化基因芯片的稳定性试验结果 | 第49页 |
| 4 讨论 | 第49-52页 |
| 4.1 靶基因扩增标记方法 | 第50页 |
| 4.2 可视化基因芯片的特异性 | 第50页 |
| 4.3 可视化基因芯片的敏感性 | 第50-52页 |
| 第四章 可视化共检基因芯片检测技术的临床应用 | 第52-58页 |
| 1 | 第52页 |
| 1.1 生物材料 | 第52页 |
| 1.2 临床样本 | 第52页 |
| 1.3 主要试剂和仪器设备 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-54页 |
| 2.1 引物和寡核苷酸探针设计合成 | 第52-53页 |
| 2.2 可视化基因芯片制备 | 第53页 |
| 2.3 核酸样本的提取 | 第53-54页 |
| 2.4 不对称PCR扩增标记 | 第54页 |
| 2.5 临床样品的检测 | 第54页 |
| 2.5.1 PCR/RT-PCR检测临床样品 | 第54页 |
| 2.5.2 可视化基因芯片检测临床样本 | 第54页 |
| 2.5.3 两种检测方法结果的符合率 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-56页 |
| 3.1 PCR/RT-PCR临床样品检测结果 | 第55页 |
| 3.2 可视化基因芯片临床样品检测结果 | 第55页 |
| 3.3 两种检测方法的符合率 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 4.1 可视化基因芯片的临床初步应用 | 第56-57页 |
| 4.2 可视化基因芯片的应用前景 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 本研究的创新点 | 第59-60页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 附录 | 第79-84页 |
| 附录一: 靶基因的序列信息 | 第79-82页 |
| 附录二: 临床样品信息表 | 第82-83页 |
| 附录三: 部分临床样品检测结果图 | 第83-84页 |
